ABCB1基因CpG岛甲基化影响氯吡格雷吸收的表观遗传调控机制

氯吡格雷是防治缺血性脑卒中的关键药物之一，临床应用时有18%～30%患者存在氯吡格雷抵抗，是导致血栓事件的重要原因。氯吡格雷抵抗与氯吡格雷吸收下降密切相关，但影响氯吡格雷吸收的表观遗传调控机制尚不清楚。我们前期研究表明：P-糖蛋白高表达使氯吡格雷吸收下降，可能与氯吡格雷抵抗相关。CpG岛低甲基化是导致基因表达增高的重要原因，P-糖蛋白由ABCB1基因编码，故我们提出假说：ABCB1基因CpG岛低甲基化状态可能促进P-糖蛋白表达增加，使氯吡格雷吸收下降，从而导致氯吡格雷抵抗。本研究拟在Caco-2细胞和患者样品中，通过ABCB1基因去甲基化靶向调控、甲基化特异性PCR、RT-PCR和液相色谱-质谱法等方法，研究CpG岛甲基化状态对ABCB1基因mRNA转录、P-糖蛋白表达和氯吡格雷吸收的影响，意在阐明影响氯吡格雷吸收的表观遗传调控机制，为认识氯吡格雷抵抗及防治血栓提供新的理论依据。

1) 试验已按原计划进行；.2) 优化并建立了脑卒中病人血浆中氯吡格雷及其代谢物的浓度的测定方法，.以及Caco-2细胞转运吸收模型；.3) 严格按照病人入选标准和排除标准纳入282例缺血性脑卒中患者，收集了患者的临床资料和生物样品，分析患者ABCB1\ABCC3基因CpG岛甲基化状态对mRNA转录、P糖蛋白\MRP3表达和氯吡格雷吸收的影响。结果发现：患者ABCB1基因CpG岛甲基化状态会影响氯吡格雷的吸收，ABCB1基因的高甲基化使氯吡格雷外排减少，氯吡格雷吸收增加；ABCB1基因的低甲基化使氯吡格雷外排增加，氯吡格雷吸收减少；但是，患者ABCC3基因CpG岛甲基化状态对mRNA转录、MRP3蛋白的表达和氯吡格雷吸收没有影响；.4)已按实验计划测定了Caco-2单层细胞经去甲基化处理后ABCB1\ABCC3基因CpG岛甲基化状态对ABCB1\ABCC3mRNA转录水平、P糖蛋白\MRP3表达水平的影响。结果发现：Caco-2单层细胞经去甲基化处理后会出现不同的甲基化状态，进一步影响ABCB1基因mRNA的转录水平，即ABCB1基因的高甲基化使ABCB1 mRNA的转录水平降低，ABCB1基因的低甲基化使ABCB1 mRNA的转录水平增加；同时，ABCB1基因的低甲基化使P糖蛋白的表达水平增加；使氯吡格雷外排增加，氯吡格雷吸收减少。但是，Caco-2单层细胞ABCC3甲基化状态对mRNA转录、MRP3蛋白的表达和氯吡格雷吸收没有影响；.5)参加学术交流会议4次；.6)协助培养硕士研究生 2名，本科生2名；.7)以第一作者形式发表相关相关学术论文8篇，其中SCI文章7篇，国内核心统计源期刊文章1篇；.8）获2014年南京市科技进步奖三等奖、2013年南京市科技进步奖三等奖、2013年南京市卫生局新技术引进奖二等奖和2012年南京市卫生局新技术引进奖一等奖各一项。