DNA甲基化酶Dnmt1和组蛋白甲基化酶G9在绵羊体细胞克隆胚胎中的表达研究

基因组DNA去甲基化不彻底是体细胞克隆胚胎中的普遍现象之一，并可能是导致克隆胚胎不能正确重编程的主要原因。但是目前对这一现象的发生机制仍不清楚。本申请项目拟从DNA甲基化酶Dnmt1和组蛋白甲基化酶G9入手，通过研究它们在体细胞克隆胚胎中的表达情况，来分析克隆胚胎DNA去甲基化不足是否是由于这两个酶的异常表达造成。拟采用RT-PCR法和间接免疫荧光染色法分别从mRNA和蛋白质水平上对Dnmt1和G9的表达进行检测。然后，再采用免疫荧光双标的方法，对Dnmt1、G9、DNA甲基化和H3-K9甲基化四种抗体进行两两交叉共定位，以分析这两个酶及其调控的两种表观遗传标记之间的相互关系，以最终确定Dnmt1和G9是否对克隆胚胎的DNA甲基化异常有直接作用。本项目的实施可以为揭示克隆胚胎发育失败的机制提供重要信息，也可能为改进克隆的技术程序提供实验依据。