SIRT1/SRY乙酰化途径调控PCOS患者IL18表达的作用机制研究

PCOS（polycystic ovarian syndrome, PCOS）is one of the most important factors leading to the infertility in childbearing age women. Our preliminary data showed that IL18 was the inflamatary cytokine with most significant difference beween PCOS patients and non-PCOS control patients; SIRT1/SRY acetylation pathway might play an important role in regulating IL18 expression of PCOS patients. However, its mechanism is unclear. In this study, western-blot and immunohistochemical techniques were used to study the expressions of IL18,SRY and SIRT1 in ovary paraffin-fixed tissues and fresh granular cells of PCOS patients and non-PCOS control patients; dual luciferase report system,electrophoretic mobility shift assay and site-directed mutagenesis, co-immunoprecipitation and assay for acetylization were used to study the the molecular mechanisms of regualting IL18 expression trhough SIRT1/SRY acetylation pathway in PCOS patients; PCOS animal mode inducd by DHEA was used to verify the mechanism of SIRT1/SRY acetylation pathway regulating the IL18 expression. The research of SIRT1/ SRY/IL18 pathway might contribute to clearing the pathogenesis of PCOS and thright new light on the candidate therapeutic target of PCOS..

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女不孕的重要病因。前期通过基因微阵列芯技术、血清ELISA检测、生物信息技术等发现IL18为PCOS患者与非PCOS对照组差异最显著的炎症因子；SIRT1/SRY乙酰化途径可能参与调控PCOS卵巢颗粒细胞IL18表达，但具体机制尚不清楚。本课题拟用免疫组化、Western-blot等探讨IL18、SRY和SIRT1基因在PCOS患者及非PCOS对照组卵巢石蜡标本及新鲜卵巢颗粒细胞中的表达；通过双荧光素酶、凝胶迁移电泳（EMSA)、电离质谱、氨基酸定点突变、乙酰化水平鉴定等探索SIRT1通过去乙酰化调节SRY转录活性影响PCOS颗粒细胞IL18表达的分子机制；最后通过构建DHEA诱导的PCOS动物模型在体内明确SIRT1/SRY信号通路调节IL18表达的作用机制。SIRT1/SRY/IL18信号通路的研究可能有助深入阐明PCOS的发病机制及候选治疗靶点。

我们已知多囊卵巢综合征（PCOS）是一种临床高度异质性，病因复杂的疾病，其发病机制仍不清楚。近年来，有学者提出PCOS患者体内存在慢性低度炎症反应，因此慢性炎症及其相关的氧化应激可能对PCOS的发生发展以及其远期风险有重要的意义。在之前的研究中，我们发现PCOS患者血清中炎症因子IL-18明显升高，但其在子宫内膜中的表达及调控研究尚少。 为探讨PCOS患者子宫内膜中炎症因子IL-18的表达情况及其临床意义。验证IL-18的上游调控因子SIRT1以及C/EBP-β对子宫内膜中IL-18的调控作用。我们利用免疫组化法对PCOS患者及对照组增殖期子宫内膜IL-18的表达进行定位。利用实时定量PCR以及Western Blot方法分别对PCOS和对照组子宫内膜中IL-18的基因和蛋白进行检测。利用CO-IP和双荧光素酶实验验证SIRT1与C/EBP-β，以及C/EBP-β与IL-18的相互作用关系。并对子宫内膜细胞体外分离培养，利用病毒转染过表达SIRT1，检测C/EBP-β及IL-18 表达的变化。C/EBP-β与IL-18的相互作用。对增殖期子宫内膜上皮和基质细胞进行体外分离培养，利用慢病毒转染过表达SIRT1，发现 C/EBP-β与IL-18蛋白表达均明显升高。研究发现PCOS患者增殖期子宫内膜中，IL-18基因和蛋白的水平较对照组明显升高。利用免疫共沉淀实验证实了SIRT1和C/EBP-β的结合，利用双荧光素酶实验证实C/EBP-β与IL-18的相互作用。对增殖期子宫内膜上皮和基质细胞进行体外分离培养，利用慢病毒转染过表达SIRT1，发现 C/EBP-β与IL-18蛋白表达均明显升高。通过本研究，我们发现炎症因子IL-18在PCOS患者增殖期子宫内膜中的表达升高。而去乙酰化酶SIRT1可以激活转录因子C/EBP-β，从而促进子宫内膜细胞IL-18的表达，并验证了SIRT1/C/EBP-β/IL-18信号通路。为进一步阐明PCOS患者炎症因子高表达的原因提供了理论依据，并间接提示PCOS患者子宫内膜容受性下降与炎症相关。