新城疫病毒重组异源基因疫苗特异性抗肿瘤研究

新城疫病毒（NDV）具有内源性溶瘤能力，可以特异地杀伤肿瘤细胞，而对人类正常细胞没有损害。Endoglin是肿瘤新生血管生成的标志性分子之一。异种移植时引发超急性排斥反应的异种（如猪）器官血管内皮细胞上的抗原靶分子均由α1,3GT（α1,3半乳糖基转移酶）催化合成，而猴与人类无α1,3GT表达。本研究在已完成的国家自然科学基金课题"超急性排斥反应靶向抗肿瘤自杀基因疫苗研究"基础上，继续根据超急性排斥反应机理，运用反向遗传技术，将本研究室分离的NDV弱毒性7793株与猪α1,3GT mini-gDNA构建成NDV-α-1,3GT重组病毒，经纳米脂质体包被、PEG修饰后与Endoglin单链抗体交联成PILs疫苗，转染猴肿瘤血管内皮细胞，完成体外实验。将该疫苗靶向导入荷乳腺癌猴体内，以研究其在猴体内肿瘤血管内皮细胞和癌细胞上的表达及其伴随的α-Gal抗原肽的表达及其诱导的超急性排斥应抗瘤效应。

本项目探讨运用肿瘤新生血管Endoglin(END)单链抗体将重组猪α1,3GT基因mini-gDNA的新城疫病毒NDV（rNDV）靶向肿瘤，研究其抗癌效应。首先，运用人源噬菌体抗体库技术筛选出肿瘤新血管生成的标志性分子Endoglin的单链抗体。用肺癌细胞A549建立重构人免疫系统的SCID鼠肿瘤模型（正如先前进展报告所述，由于猴肿瘤模型成本昂贵，经费不足，本研究在后期实验中采用了前期研究重构人免疫系统荷瘤SCID鼠代替荷瘤猴动物模型）。由Endoglin单链抗体靶向的纳米脂质体包裹能表达猪α1,3GT基因mini-gDNA的rNDV，制备靶向肿瘤重组病毒基因疫苗PILs（rNDV/END），完成体外杀伤实验及相关研究。然后，用静脉注射将其用于荷人免疫系统的SCID鼠肺癌动物模型，研究体内抗肿瘤效应。结果发现，荷瘤动物的肿瘤体积显著缩小，延长了荷瘤动物生存期，证明PILs在体内产生了较理想的抗肿瘤效应。该项目研究成果为肿瘤免疫疗法提供了新的思路，具有重要的理论意义和广泛应用前景。