新型隐球菌的分子生物学分类研究

复活和重新鉴定了118株标准株、野生株和临床株新生隐球菌的血清型。建立了2种提取隐球菌基因组总DNA的新方法：玻璃珠振扰破壁法和碱性异硫氰酸胍沸腾法，即可用于体外培养物，也可直接用于临床标本，得率高、纯度好。选用的7对引物来自微卫星DNA、ITS、IGS及荚膜相关基因，其PCR产物可以鉴别种或变种，而中国致病隐球菌IGS序列与ATCC标准株的IGS序列无差别。建立酶和差速离心法分离隐球菌线粒体及从中提取mtDNA的方法，经分光光度计分析，获得的mtDNA没有RNA、蛋白质及染色体DNA的污染。以同位素末端标记杂交法研究隐球菌mtDNA的同源性，发现种间、种内、变种及血清型之间的同源性差异程度不同，其中A、D型之间差异最小。