癌基因MSP58及其相互作用分子在神经胶质瘤增殖中的作用及其机制研究

MSP58是近年来发现的一个具有癌基因特性的新基因，在多种细胞生命活动中有着重要作用，但目前对其在细胞内所执行功能的分子机制尚不清楚。我们在前期研究中首次发现MSP58在胶质瘤中高表达，具有促进胶质瘤细胞增殖的作用，同时证实两个细胞周期调节相关分子ATM和E2F2受到MSP58的调控。根据结构分析及文献报道的提示，我们推测：MSP58可能通过分别与PTEN和STRA13的相互作用调控E2F2和ATM的表达，在胶质瘤增殖中发挥作用。本研究拟在胶质瘤细胞中过表达PTEN分子和STRA13显性负突变体，采用荧光素酶报告系统，染色体免疫共沉淀等方法深入研究MSP58调控胶质瘤细胞增殖的分子机制。进一步收集胶质瘤临床标本分析验证MSP58及其信号通路中的关键分子与胶质瘤恶性增殖的相关性。本研究将明确MSP58在胶质瘤增殖中发挥作用的分子机制，为胶质瘤恶性行为的控制及临床治疗提供重要线索和新的思路。

目的：MSP58和STRA13在人类许多肿瘤中均存在高表达并且与肿瘤的恶性进展关系紧密，我们对MSP58和STRA13在胶质瘤中的表达及其预后价值进行评估，并且进一步探讨MSP58及STRA13在人脑胶质瘤中发挥的恶性作用。 .方法：.通过免疫组化、TdT介导dUTP缺口末端标记法分、Real time PCR、Western blot、慢病毒载体的构建、稳转细胞系的构建、裸鼠成瘤模型等技术方法在体内、外分别研究MSP58和STRA13对人脑胶质瘤发挥的恶性作用。.结果：.1、MSP58高表达与胶质瘤高水平的病理级别显著相关。该分子高表达患者的总生存期显著低于低表达者。.2、STRA13高表达与肿瘤高水平的病理级别和替莫唑胺化疗较差的反应性显著相关，并且可以作为一项独立的危险因素提示新诊断的原发性胶质细胞瘤患者的预后不良。在复发性胶质母细胞瘤患者中，STRA13的表达与凋亡指数呈负相关。.3、目的基因STRA13全长的获取与慢病毒表达载体pLenti6.3-STRA13的构建经PCR和测序得到证实。用pLenti6.3-STRA13转染U251和U87细胞后，通过Blasticidin筛选，获得稳定表达STRA13的U251和U87细胞株。.4、经过替莫唑胺处理30天后，U87-STRA13组移植瘤的平均重量和体积(114±12.99mg，1257±382.7mm3)，显著高于U87-cherry组（44±2.63mg，468.8±193.4 mm3，两者P＜0.001)。增殖及凋亡检测结果表明，U87-STRA13组移植瘤肿瘤细胞的增殖指数（51.6±3.74%）显著高于U87-cherry组（38.20±3.55%, t=2.600, P=0.032）；而U87-STRA13组的凋亡指数（15.26±2.20%），则显著低于U87-cherry组（44.10±2.69%，t=8.296, P＜0.0001）。.结论：.1、MSP58的表达情况与胶质瘤的恶性程度密切相关，并且能够作为胶质瘤患者独立的预后因素。.2、在胶质细胞瘤患者中，STRA13无论是作为临床预后因子或是对替莫唑胺化疗反应性的预测因子，都具有非常重要的价值。.3、成功构建了pLenti6.3-STRA13慢病毒表达载体并建立稳定表达STRA13的人脑胶质瘤U251和U87。