候选癌基因KPNA2在上皮性卵巢癌上调的分子机制及其功能研究

申请者首次报道KPNA2在上皮性卵巢癌转录和翻译水平的表达均明显高于正常组织，且其表达水平与卵巢癌患者的预后明显相关（Obstet Gynecol，2010）。目前对KPNA2在卵巢癌发生发展中的作用机制及其功能尚不清楚。我们前期研究发现，瞬转siRNA技术沉默KPNA2后的细胞株较对照细胞生长明显减缓、凋亡增加。在此基础上，本课题拟从外显子全长测序、甲基化状态分析和miRNA调控等方面探寻KPNA2在卵巢癌上调的分子机制；利用慢病毒载体构建KPNA2稳定低表达和高表达细胞株，观察转基因后体外细胞生物学功能及体内成瘤的改变；利用基因芯片检测上述细胞株基因表达谱变化，通过生物信息学分析找出受KPNA2影响的信号通路，再用蛋白免疫印迹予以证实。本项目的实施，对于阐明KPNA2在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及其机制具有十分重要的意义，并将为研发分子靶向治疗药物提供理论和实验依据。

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，其中90%为上皮性肿瘤（Epithelial ovarian carcinoma，EOC）。卵巢癌病死率一直位居妇科恶性肿瘤之首，因发病机制尚未明了，缺乏有效早期诊断及治疗方法。我们前期用人类全基因组表达谱芯片筛选出了一批在上皮性卵巢癌与正常卵巢组织中差异表达的基因，经验证后首次报道KPNA2在上皮性卵巢癌转录和翻译水平均明显上调，并发现KPNA2高表达与患者预后不良相关。细胞水平研究显示，KPNA2的敲低可抑制细胞生长增殖并诱导细胞周期阻滞，这与KPNA2显著增强c-Myc转录活性，提高Akt和FOXO3a的磷酸化水平有关；在表观遗传方面，上皮性卵巢癌细胞中KPNA2的表达水平受miR-26b调控，miR-26b可通过直接结合于KPNA2的3’UTR抑制蛋白表达。与此同时，临床病理资料分析也显示miR-26表达水平与上皮性卵巢癌临床分期、分化和远处转移有关，其表达降低与患者不良预后相关，这其中涉及miR-26b/KPNA2/OCT4轴功能失衡导致癌细胞干性增强，从而促进了EOC的进展与转移；另外，我们在进一步探索中发现，KPNA2可能通过影响JAK-STAT3、NF-κB、AKT通路变化，募集髓系来源的免疫抑制细胞，抑制多种免疫效应分子和免疫细胞，对先天性免疫和获得性免疫产生抑制作用，进而使肿瘤细胞得以逃避机体的免疫监视和攻击，导致上皮性卵巢癌转移。本项目的研究成果，阐明了KPNA2在上皮性卵巢癌发生发展过程中的作用机制，对于进一步开发可用于上皮性卵巢癌诊治的分子标志物，具有十分重要的意义。