Ghrelin以群体感应调节骨肉瘤转移相关蛋白Ezrin表达机制研究

骨肉瘤诊断时20%的患者已发生了转移，预后不佳。研究表明Ezrin与骨肉瘤转移呈正相关，寻找Ezrin表达调控基因可为转移防治开发新靶点。已知Ezrin表达受细胞密度调控，且细胞密度亦可改变肿瘤转移特性，但确切机制不明。对比发现，细胞群体密度依赖特性与细菌群体感应（Quorum sensing,QS）现象高度相似，而细菌QS中核心因子与Ghrelin的具有相同化学结构，提示Ghrelin可能参与调节Ezrin的表达。我们研究验证了Ezrin与骨肉瘤转移相关，发现了Ghrelin的表达与肿瘤细胞密度呈正相关，且较高浓度Ghrelin能对骨肉瘤细胞发挥促侵袭效应。因此我们推测：Ghrelin能以细胞群体感应方式调节Ezrin表达改变肿瘤细胞转移特性。据此，本研究根据前期基础，以骨肉瘤细胞和骨肉瘤动物模型为研究对象，探讨Ghrelin在上述模式下调节Ezrin表达并改变转移特性中的作用。

为建立体外细胞群体感应系统在肿瘤细胞转移性调节ezrin表达的研究方法，我们试图扩增ezrin基因启动子区2.36Kb片段克隆至psiCHECK+Neo载体上。选择了U2OS细胞作为Ezrin-luciferase稳定株筛选，通过不同浓度Ghrelin干预Ezrin-luciferase稳定株，并未发现预期阳性结果，为分析ezrin表达上游调节因子，初步选取其中可以促进ezrin表达的基因SP1，Src，RB1作为阳性对照，初筛对314个基因进行了RNAi筛选，得到154个初筛阳性基因pools。针对上述154个阳性基因pools进行qPCR验证，发现了BRD2,IRAK1,CHD3,PPP2CA,EIF4AK3,HIPK3,DOT1L等7个RNAi片段能有效抑制ezrin基因表达，进一步通过Transwell试验，我们验证了抑制其中四个基因片段对U2OS细胞侵袭有影响，具体为IRAK1,CHD3,PPP2CA片段表现为促侵袭，而BRD2片段表现为抑制侵袭效应。