NDRG2对急性髓性白血病细胞的分化及化疗敏感性的功能研究

既往研究证实NDRG2在细胞增殖、分化以及实体瘤的发生发展过程中发挥重要作用。我们近期的研究发现：NDRG2在白血病患者呈低表达，诱导白血病细胞分化成熟过程中表达升高，且发现其与化疗敏感性密切相关。为阐明NDRG2在白血病细胞分化及化疗敏感性中的作用，本研究拟①分析NDRG2在急性髓性白血病临床病例中的表达特点，并解析其原因，以阐明NDRG2的表达特征与白血病细胞的分化程度与化疗效果之间的相关性；② 应用稳定转染细胞系，体外研究 NDRG2的过表达或表达沉默对急性髓性白血病细胞分化和化疗敏感性的影响；③构建NDRG2及NDRG2显性负突变体的的腺病毒载体，同时建立小鼠白血病模型，体内研究NDRG2对相关病理过程及化疗效果的影响。最终为白血病在分子水平的诊断与靶向治疗提供重要的理论基础，同时为深入研究NDRG2基因的功能提供新的线索。

本项目的研究目的：阐明NDRG2的表达特征与急性髓性白血病细胞的分化程度及化疗效果的相关性，明确NDRG2在急性髓性白血病细胞的分化和化疗中的生物学作用及可能的分子机制，最终为急性髓性白血病在分子水平的诊断与靶向治疗提供重要的理论基础，同时为深入研究NDRG2基因的功能提供新的线索。研究结果包括：（一）、NDRG2在45%的急性髓性白血病病例中的表达降低,提示 NDRG2 可能与白血病细胞的分化相关；（二）、应用维甲酸或三氧化二砷诱导急性髓性白血病细胞系NB4分化，结果发现在分化过程中， NDRG2表达水平升高， 进一步明确了NDRG2可以促进白血病细胞的分化；（三）、应用构建的NDRG2慢病毒载体感染HL60细胞系及NB4细胞系，并以空载体为阴性对照，应用Western Blot及流式的方法检测细胞分化相关分子（CD11B,CD33，G-CSFR及GM-CSFR）的表达情况，结果表明NDRG2的过表达可以明显增强全反式维甲酸诱导白血病细胞分化的能力；(四)、应用MTT、流式分析及TUNEL染色的方法分析NDRG2慢病毒载体感染HL60细胞系及NB4细胞系后细胞的存活情况，结果表明NDRG2的过表达可以明显增强白血病细胞的化疗敏感性。（五）、应用生物软件预测调控NDRG2可能的micoRNA，体外构建相关microRNA表达载体和含Ndrg2 3’-UTL的荧光报告载体，筛选到miR-130分子可以调控NDRG2的表达，同时通过对临床病例进行分析，确认了miR-130分子与急性白血病发病及疗效有一定的相关性。小结：本项研究结果表明了NDRG2作为一抑癌基因，可以促进白血病细胞的分化及增强化疗敏感性，同时发现并明确了可以调控NDRG2表达的microRNA分子（microRNA 130），为以后本病的诊断及治疗增加了新的分子标记，并为下一步研究以NDRG2分子为基础的生物治疗提供了线索及依据。本项目培养硕士研究生2名，拟发表SCI文章2篇，均已投出。