RNA甲基化m6A修饰位点变异与先天性心脏病遗传易感机制研究

Congenital heart disease (CHD) is currently the leading cause of infant mortality worldwide and the most common subtype of CHD is septal defect(SD). Our previous genome-wide association study (GWAS) identified several susceptibility loci for CHD in Han Chinese. However, the causal variants for SD and their potential biological function need to be investigated. We previous imputed our existing genome-wide scan data , then achieved the associations between single nucleotide polymorphisms (SNPs) modified by m6A and SD risk by annotating genome-wide m6A motif and conducting linkage disequilibrium (LD) analysis .We found 4 independent m6A modified SNPs showed significant associations with SD risk. In the current study, we will perform a validation of the 4 SNPs in a case-control study to investigate the potential causal variants. On basis of the validation, molecular biology and animal model experiments are designed to identified the functions of the SD associated m6A modified causal variants. The results in this study may provide insight into pathogenic mechanism of SD and be used to screen high-risk CHD populations for early prevention, diagnosis and treatment strategy.

先天性心脏病是新生儿死亡的首要病因。其中，先天性心脏间隔缺损是先天性心脏病中最常见的类型。本课题组前期开展的中国人群全基因组关联研究（GWAS）发现了多个先天性心脏病易感区域。然而其真正的致病变异目前仍尚未可知，生物学功能也有待鉴定。申请人前期利用初筛芯片数据综合数据库进行基因型填补，根据m6A修饰位点保守序列在全基因组范围内筛选结合连锁不平衡进行分析，发现了4个与先天性间隔缺损发生风险显著相关独立的m6A修饰遗传变异。本研究将首先对上述4个独立遗传变异在大样本人群中对进行独立验证，挖掘潜在致病变异。在此基础上，进一步设计功能实验证实致病变异在细胞和动物模型中通过m6A的水平改变影响关键基因生物学功能，导致先天性心脏间隔缺损易感。本研究结果将有助于阐明中国汉族人群先天性心脏间隔缺损发生的分子遗传学机制。同时研究结果可用于先天性心脏病高危人群筛查，对于疾病的早期诊断、预防和治疗具有重要意义。

先天性心脏病是新生儿死亡的首要病因。其中，先天性心脏间隔缺损是先天性心脏病中最常见的类型。本课题组前期开展的中国人群全基因组关联研究（GWAS）发现了多个先天性心脏病易感区域。然而其真正的致病变异目前仍尚未可知，生物学功能也有待鉴定。本课题组通过 WGS 测序数据筛选分析，对心脏间隔的特殊病种-单纯型 TOF 家系进行全基因组测序研究，综合考虑基因的编码区和非编码区，进一步验证了NOTCH1 潜在调控元件及其调控区域内相应非编码突变的功能效应。结果表明NOTCH1调控元件上的非编码突变增加了沉默子的活性，沉默子区域的非编码突变降低了 NOTCH1 的表达。并通过全基因组关联研究和扩大样本验证，发现了rs1044598的变异等位基因与降低先天性心脏病发病风险有关，首次鉴定了COLVI基因多态性与室间隔缺损的关联。目前课题组已经成功建立母体暴露邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（Di-2-ethylhexyl phthalate，DEHP)致小鼠胎儿心脏间隔缺损动物模型，对筛选得到的4个先天性间隔缺损发病风险显著相关的RNA甲基化m6A修饰位点进行分析。本项目资助累计已发表论文3篇，其中已发表SCI论文1篇，另投稿中SCI论文3篇。培养博士2人、硕士2人。项目资助经费25.0万元，支出20.88万元 ，各项支出与预算基本相符。剩余经费4.12万元，计划用于本项目后续支出。