EB病毒miR-BART16调节凋亡信号通路促进淋巴瘤发生的机制研究

Epstein-Barr virus (EBV) is closely associated with human malignant lymphoma. In the preliminary study, we screened out 3 differently expressed EBV miRNAs from EBV-induced lymphoma model by using miRNA chip. We found that ebv-miR-BART16 maybe modulate apoptotic signaling pathway of EBV-infected cells, which could be one of the mechanisms of EBV in inducing malignant transformation of lymphocyte. This project plans to validate the target genes of ebv-miR-BART16 related to apoptosis signaling pathway by using reporter gene technology. The malignant phenotype of lymphoma cell such as characters of anti-apoptosis and proliferation were detected by using tumor bearing mice model and lymphoma cell lines which is stably transfected with ebv-miR-BART16 ; and then we are trying to obtain the direct evidences about ebv-miR-BART16 modulating proliferation and apoptosis signaling molecules by detecting cell apoptosis and the molecular activity levels associated with apoptosis signal pathways and finally reveal the biological function of ebv-miR-BART16 and its role in lymphomagenesis.

EB病毒（EBV）感染与恶性淋巴瘤的发生关系密切。前期研究中我们利用miRNA芯片技术从EBV诱发淋巴瘤模型中筛选到3个差异表达的EB病毒miRNAs，其中ebv-miR-BART16对宿主细胞凋亡信号通路具有调控作用，可能通过这一机制促进或诱导淋巴细胞恶性转化。本课题拟采用报告基因技术证实ebv-miR-BART16对凋亡信号通路相关基因的靶向调节作用，运用细胞模型、荷瘤小鼠模型检测评价ebv-miR-BART16对淋巴瘤细胞系增殖和抗凋亡恶性表型的影响，通过检测细胞凋亡及凋亡信号通路各级联分子的活性，获得ebv-miR-BART16参与调节细胞增殖与凋亡的直接证据，揭示ebv-miR-BART16的生物学功能及其在淋巴瘤发生中的作用机制。

EB病毒感染淋巴细胞与淋巴瘤发生之间，存在着由众多的基因及其表达产物相互作用形成的多维功能网络。本研究在hu-PBL/SCID嵌合小鼠体内利用EBV成功诱发出人源性B细胞淋巴瘤，采用基因芯片和miRNA芯片获得了EBV诱发淋巴瘤与相应的“正常人”淋巴细胞的差异表达转录组学数据，构建出差异表达基因和miRNAs相互作用网络图。采用miRNA芯片检测EBV诱发淋巴瘤，筛选出29个差异明显的人类miRNAs，其中25个下调，4个上调。联合分析差异基因和差异miRNAs，在差异人类miRNAs所靶向的差异基因中共筛选出29个基因功能模块，包括6个上调模块和23个下调模块。上调的基因模块主要涵盖细胞有丝分裂和细胞周期调控；下调的基因模块主要涵盖免疫应答，炎症反应，细胞损伤修复和细胞趋化。提示EBV可能通过复杂的分子调控网络影响细胞周期调控，介导免疫逃避，促进细胞增殖和抑制凋亡信号等机制诱导淋巴瘤发生。利用miRNA芯片检测筛出3个上调的EB病毒miRNAs。生物信息学分析提示ebv-miR-BART16可靶向抑制RYBP和caspase-6的表达，初步验证后发现ebv-miR-BART16可能通过抑制细胞凋亡信号而促进淋巴瘤的发生。本研究中我们发现ebv-miR-BART16对于淋巴细胞的抗凋亡作用，主要机制是抑制了内源性凋亡信号途径即线粒体途径的启动与活化，在整个分子级联中从Bcl-2家族中的BAX和caspase家族中的caspase-9、caspase6和caspase-3的表达都受到ebv-miR-BART16的不同程度抑制，直接导致细胞免于内源性途径凋亡并维持细胞的生存状态。这些结果提示，ebv-miR-BART16对淋巴细胞凋亡机制的影响可能参与了淋巴瘤的发生发展。