稻瘟病菌低毒相关病毒 MoHAV-1的分子生物学特性及其生物防治潜力研究

rice blast was the most important disease for crop,and was the serious threat of food Security for our country and even the world ,rice blast were controled depends on chemical pesticide.in Pilot studies ，QSPL12F1S1that is one strain of Magnaporthe oryzae was isoloted ,we found that it infected with mycovirus.The mycovirus from QSPL12F1S1 resulted in deeply decline of Virulence from QSPL12F1S1 resulted in deeply decline of Virulence,phenomenon were reported that Magnaporthe oryzae was infected with mycovirus,but Magnaporthe oryzae chrysovirus 1（MOC1）could result in growth slowly and pigment abnormal,in our study，by cloning cDNA and Sequencing analysis for genome of doublestranded RNA virus of MoHAV-1, Clear MoHAV-1 genome structure characteristic of MoHAV-1 genome ; and Purification of virus particles, using the method of Transfection, further clear MoHAV-1 and associated virus 1（MoHAV-1）was related to hypovirulent strain of Magnaporthe oryzae was study on biological traits and Biocontrol potential. result of research can not only shaw that find new virus, rich content of mycovirus, but also provide new resources and materials for controlling rice blast. therefore, the research was important theoretical and practical value.

稻瘟病最重要的作物病害之一，严重威胁我国乃至世界的粮食安全，其防治主要依赖化学农药。前期研究分离获得了稻瘟菌菌株QSPL12F1S1，并发现其感染了一种真菌病毒。因为该病毒可能与菌株QSPL12F1S1的致病力衰退相关，暂命名为稻瘟菌低毒相关病毒（MoHAV-1）。稻瘟菌感染真菌病毒的现象在国际上已有报道，但仅有病毒 MOC1可引起稻瘟菌生长缓慢和产色素异常。本项目拟对MoHAV-1的dsRNA基因组进行cDNA克隆和序列分析，明确MoHAV-1的基因组结构特征；纯化病毒粒子，采用转染的方法进一步明确MoHAV-1与菌株QSPL12F1S1衰退的相关性；同时，通过人工接种携带MoHAV-1的菌株，分析其对稻瘟病的防治潜力。项目的完成不仅可以发现新的病毒，丰富真菌病毒学的内容，而且可以为稻瘟病的防治提供新的资源和材料，因此具有重要的理论意义和实践价值。

稻瘟病是最重要的作物病害之一，严重威胁我国乃至世界的粮食安全，其防治主要依赖抗病品种选育和化学农药。真菌病毒在真菌中广泛存在，一些真菌病毒可以影响病原真菌营养生长、产孢和色素形成等性状。.在前期的工作中，从发病水稻叶片上分离获得了丰富的稻瘟菌资源，研究发现在稻瘟菌中dsRNA存在多样性。其中稻瘟菌菌株QSP5被两个基因组为dsRNA的所侵染，分别将这两个病毒命名为产黄青霉病毒1-C（Magnaporthe oryzae chrysovirus 1-C, MoCV1-C）和稻瘟菌病毒3（Magnaporthe oryzae virus 3, MoV3）。通过Blastx比对，已获得的MoCV1-C部分序列与已报道的MoCV1-A（Magnaporthe oryzae chrysovirus 1-A）存在92%-97%相似性，由MoV3基因组推定的CP、RdRp分别与已报道MoV2（Magnaporthe oryzae virus 2）的CP、RdRp具有69%、 54%的相似性。.本研究主要对MoV3分子特性进行了研究。通过cDNA克隆获得了MoV3病毒的基因组全长序列，共5181个碱基。序列分析表明该病毒基因组含有两个开放阅读框（ORF）。推定ORF1编码一个分子量为80939 Da的外壳蛋白（Coat Protein, CP），ORF2编码一个分子量为90506 Da的依赖于RNA的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase, RdRp）。两个ORF之间由AUGA四个核酸序列相连接，ORF1的终止密码子与ORF2的起始密码子相重叠，此为Victorivirus属病毒具有的典型特征。另外根据MoV3的 CP及RdRp的系统进化分析，该病毒与主要侵染丝状真菌的Victorivirus属的病毒亲缘关系更近，因此，MoV3归属于Totiviridae科Victorivirus属，是一种新的真菌病毒。.采用单孢分离技术，从菌株QSP5的分生孢子获得了一株仅携带MoV3的菌株QSP5-9。菌株QSP5与QSP5-9之间的产孢量、菌丝形态以及菌落形态存在明显差异，推测MoCV1-C与菌株QSP5 的产孢能力衰退、菌丝生长和产色素异常相关。同时对MoV3的稳定性进行了初步的研究。从稻瘟菌菌株QSP5获得了100个单孢分离物，通过对随机挑选的40个单孢分