基于TRPV1介导的药物经肠粘膜转运的机制研究

Previous research we found and proved TRPV1 activation can be directly involved in the drug transport via intestinal mucosa,which is similar to other studies. However, the mechanism of TRPV1 mediating the transport is not clear. So this topic selection wider substrate, choose PEPT1, P-gp, CYP3A4 as the research model. With using of TRPV1 agonist or inhibitors, ion antagonist and typical substrates of transport protein as probe drugs, investigate the effect of TRPV1 on the transport of drugs through different intestine in vitro and in vivo. Study.on the expression of intestinal transport protein by Western Blot. In addition, we have used two different sources of capsaicin (natural capsaicin and synthetic capsaicin) in our previous research. The transport characteristic is different due to the differences in the structure of the capsaicin. So we will use these two different capsaicin as TRPV1 agonist respectively in this experiment. We adopted to explore the mediating mechanism, and the different active function between Capsaicin and Nonivamid. In order to provide basic theory for the synthetic application of capsaicin in the future.

国内外研究发现TRPV1的激活能够介导药物经肠粘膜转运，而我们的前期研究也同样证明了这种作用，然而对于TRPV1的这种介导作用产生的机制并不清楚。因此本课题预选择底物较为广泛，对各种药物的吸收和应用影响较大的转运体作为研究模型，其中包括PEPT1﹑P-gp﹑CYP3A4，通过使用TRPV1激动剂或抑制剂，离子拮抗剂并以典型转运蛋白底物为探针药物，通过体外及在体考察TRPV1对药物经不同肠段肠黏膜转运的影响，并用蛋白印迹法研究肠黏膜上转运蛋白的表达影响，为揭示TRPV1如何介导口服药物经肠粘膜吸收提供基础研究；此外，由于前期研究使用到的两种不同来源的辣椒素（天然辣椒素和合成辣椒素）可能因结构上的微小差异而呈现出了不同的透过特性，因此在实验中所使用的TRPV1激动剂均分别采用两种结构相似的辣椒素，并期望在探索介导机制的同时，发现两种辣椒素的作用差异，为今后合成辣椒素的应用提供理论依据。

体外透过结果显示P-糖蛋白（P-gp）抑制剂维拉帕米对辣椒素经肠粘膜吸收和分泌方向的透过没有影响，并保持着结肠特异性透过的性质。乳腺癌耐药蛋白转运体（BCRP）抑制剂新生霉素显著降低了辣椒素经回肠和结肠粘膜在吸收方向的透过，对分泌方向的透过没有影响。证明辣椒素不是P-gp的底物，并在维拉帕米的存在下，辣椒素仍然具有结肠特异性透过，说明P-gp对于辣椒素的肠道区段性透过影响不大。辣椒素可能并不是BCRP的底物，但新生霉素能够抑制辣椒素的转运行为，与辣椒素受体存在一定关系。.根据辣椒素的透过特性，制备了壳聚糖（CTS）包裹的辣椒素固体脂质纳米粒（CAP-SLNs），大鼠结肠定位给药显示，CTS-CAP-SLNs的AUC和Cmax较原料药CAP分别提高了1.81和1.95倍。.为了阐明capsaicin和nonivamide在体内和体外透过方面的差异性，运用荧光猝灭光谱和紫外光谱法研究模拟人体生理条件下两种辣椒素与牛血清蛋白在结合力上是否有差异。荧光猝灭法及UV法求得两种辣椒素与BSA结合常数，经统计学分析F值均大于0.05，不具有统计学意义，不同来源辣椒素与牛血清蛋白的结合力常数无统计学差异。.体外和体内的两种辣椒素透过显示，capsaicin和nonivamide经空肠的透过都比较差。而在回肠段，nonivamide (10.12×10^-6 cm/s)的透过却显著高于capsaicin (5.34×10^-6 cm/s, P<0.05)。相反的，在结肠段，nonivamide (8.42×10^-6 cm/s)的透过显著低于capsaicin (14.48×10^-6 cm/s, P<0.05)。体内实验与体外较为相似，nonivamide较capsaicin在回肠有更高的药时曲线，在结肠却有着更低的药时曲线。结果证明capsaicin 和 nonivamide表现出不同的肠段透过特性。