miR-146a调控CXCR4/Smad4蛋白表达在含G-CSF的预激方案治疗急性髓性白血病中的作用

The regimen of cytarabine, aclarubicin and G-CSF (CAG) has been widely used in China and Japan for treatment of acute myeloid leukemia (AML) . The rationale for the regimen is still not very clear. The clinical therapeutic effects may be affected by the protection of stromal cells on leukemia cells and leukemia cells proliferation biological behaviours. We found the expression of Smad4 protien was regulated by miR-146a expression level and had effects on cell proliferation. Acute myeloid leukemia cell lines and leukemia cells from patients will be research in this study. NF-κB→miRNA146a→CXCR4/Smad4 pathway will be investigated on with or without G-CSF treatment based signal transduction. The relationship of decreasing expression CXCR4/Smad4 and increasing the anti-leukemia cells effect of low dose clarubicin and cytarabine will be investigated with or without G-CSF treatment based on cell proliferation and chemotaxis. Based on leukemia cells homing mechanisms being regulated by miR-146a in CAG regimen, we want to confirm the expression levels of miR-146a in patient plasma as a prognosis biomarker which can be used in clinic. This will provide a trend in leukemia chemotherapy.

包含阿克拉霉素、阿糖胞苷和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的化疗方案在国内和日本被广泛应用于急性髓性白血病（AML）的治疗。CAG化疗方案的作用机制还不十分明确。骨髓基质细胞对白血病细胞的保护和白血病细胞的增殖行为影响临床治疗效果。我们以前的研究发现miR-146a通过调控Smad4蛋白的表达影响细胞的增殖。本课题以AML细胞株和病人原代白血病细胞为研究对象。从信号传导角度观察G-CSF作用前后，NF-κB→miRNA146a→CXCR4/Smad4途径中关键因子的变化；从细胞增殖、趋化角度，观察G-CSF作用后，CXCR4和Smad4表达下降,是否增加小剂量的阿克拉霉素和阿糖胞苷对白血病细胞的杀伤作用。在完善我们对miR-146a在CAG化疗方案中调控机制的理解基础上，明确能否根据患者血浆内的miR-146a的表达，作为判断治疗预后的临床标志物，为白血病的特异性分层治疗提供可能的方向。

由阿糖胞苷、阿霉素、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）组成的CAG方案已广泛应用于老年、复发/难治性、继发性急性髓性白血病患者取得较好的疗效。但G-CSF在预激方案中的作用仍不甚明确，本课题对G-CSF削弱基质细胞介导的白血病耐药及可能机制进行研究。.通过在体外建立HS-5/HL-60共培养体系，模拟骨髓基质细胞与白血病细胞之间的相互作用。希望明确基质细胞对白血病细胞有无保护作用、G-CSF能否打破这种保护作用及相关的信号通路。收集初发 AML患者的骨髓和临床资料，分析G-CSF对 OS 和 RFS 的影响, 分析患者miR-146a变化对 生存期的预测意义。.HL-60细胞与HS-5细胞共培养时，HL-60细胞凋亡减少；G-CSF能部分逆转HS-5的保护作用；HL-60细胞单独培养时，G-CSF对HL-60细胞凋亡无明显影响。G-CSF能够明显降低HL-60细胞膜表面/细胞内CXCR4蛋白和CXCR4 mRNA表达，同时上调miR-146a表达；CXCR4与miR-146a之间存在负性相关关系。G-CSF同时上调NF-κB P50、P65 mRNA表达。经 G-CSF作用HL-60 细胞后，细胞内 miR-146a 表达上调伴随 Smad4 基因蛋白表达下调,进入细胞周期的细胞增多,最终增强 HL-60 细胞对阿糖胞苷的敏感性。.收集初发97例 AML 患者的临床资料，分析结果表明 G-CSF 可以延长 AML 患者的总生存期。AML 患者骨髓原代细胞中 miR-146a 与 CXCR4 表达呈负相关， G-CSF 可以上调原代细胞中 miR-146a 水平并降低 CXCR4 表达。使用 G-CSF 后细胞内 CXCR4 显著降低或 miR-146a 显著增高的患者总生存期及无复发生存期较长。 CXCR4 高表达患者中使用 G-CSF 后 CXCR4 表达显著降低的患者远期预后也 较好。.G-CSF 可以通过调控 NF-KB/miR-146a 信号通路影响 CXCR4 和 Smad4 表达，促进白血病细胞从骨髓造血龛中释放到外周，打破骨髓 基质对白血病细胞的保护作用,同时刺激处于静止状态的白血病细胞进入细胞增 殖阶段，增强其对阿糖胞苷的敏感性，最终延长 AML 病人的总生存期。