药物超敏反应综合征患者T细胞受体CDR3免疫组库与谱系漂移机制研究

Drug hypersensitivity syndrome ( DIHS ) is a severe drug eruption and multiple organ damage which is always given to attention. CD8+T cells plays a key role in the pathogenesis of DIHS, and human herpes virus-6 reactivation may be associated with the prolonged course and recurrence of DIHS. T cell receptor ( TCR ) is the key element which contribute to T cell activation, identification and combined with HLA / antigen peptide complex. Complementarity-determining region 3 ( CDR3 ) as the antigen binding site, is also T cell specific immune response characteristics.In order to find out the dominant TCRβCDR3 clones and the drift of immunorepertoire of DIHS, this project plans to detect the peripheral blood TCR βCDR3 gene sequence of DIHS patients in different time points by the newly developed amplicon rescue multiple PCR and high-throughput sequencing technology, consequently establish the TCR repertoire. Then, the restricted usage and clonal expansion of TCR will be found, that may be the disease specific TCR clone. To explore the mechanism of immune repertoire drift in DIHS from the aspects of molecular genetic and HHV-6 virus antigen driven. This study will provide new theoretical foundations for the prevention, early intervention, effection monitoring and immunotherapy of DIHS.

药物超敏反应综合征（DIHS）因多器官受累、病情严重、救治难度高而备受关注，CD8+T细胞在其中起关键作用，而人疱疹病毒-6（HHV-6）感染可能与其病情复发加重有关。T 细胞受体（TCR）是T 识别HLA/抗原肽复合物并与之结合从而发挥杀伤毒性的关键元件，其中可变区互补决定区3（CDR3）为抗原结合位点，亦是T 细胞特异免疫应答的标志。为研究DIHS疾病特征性TCRβCDR优势克隆及其在病程中的谱系漂移特点，本项目拟采用新近发展的扩增子救援多重PCR 与高通量测序技术半定量扩增，动态测定DIHS患者病程进展中外周血CD8+T 细胞TCRβCDR3 基因序列，建立TCR 免疫组库,研究其优势序列及氨基酸取用特点，找到疾病特征性TCR 谱。同时,从分子遗传、HHV-6病毒抗原驱动两方面研究TCR 谱系漂移的发生机制，为该病预防、早期干预、疗效监测乃免疫治疗研究提供新的理论依据。

药物超敏反应综合征(drug-induced hypersensitivity syndrome,DIHS)是一类具有一定的特征并可危及患者生命的严重皮肤药物不良反应综合症。DIHS又称伴有嗜酸性粒细胞增多及系统症状的药疹(drug reaction with eosinophilia and systemic symptoms,DRESS)。若累及多个器官，则导致患者死亡的风险显著增加。DIHS发病是一个遗传、药物、病毒和机体免疫反应相互作用的过程，可能涉及致敏药物药代动力学和代谢途径异常、HLA基因遗传易感性以及疱疹病毒的再活化等多个机制。DIHS患者出现的反复发热、严重的并发症及撤药后病情反复加重与人类疱疹病毒再激活存在着一定的相关性。研究表明CD8+ T细胞在DIHS发病过程中发挥了重要作用，而T细胞抗原受体(T cell antigen receptor,TCR)是其识别特异性抗原及被激活的关键环节。.TCR介导的交叉识别(病毒激活的T细胞与某些致敏药物之间存在的交叉反应)是DIHS发病的一个重要原因。TCR的基因重排是完全随机的，并表现出多家族和多克隆性。互补决定区(complementarity determining region 3,CDR3)是T细胞直接与抗原接触的位点，一种CDR3氨基酸序列代表一个T细胞克隆，在病理情况下，某一个或几个亚家族T细胞针对特异抗原产生单克隆或寡克隆扩增，表现为TCR谱系漂移。我们采用高通量测序技术，对DIHS患者T细胞CDR3共同基序或特征性TCR谱鉴定并分析其与DIHS发生、发展及症状严重程度的关系。主要结论：1.与健康对照外周血相比，DIHS患者外周血中高频率T细胞克隆比例明显升高，呈现选择性扩增的组成特征。2.患者外周血中CD8+ T细胞受体库变化程度的不同主要反映了不同患者维持其高频T细胞克隆的能力。3.DIHS患者临床症状严重程度与CD8+ T细胞受体库波动强度呈正比，而与CD4+ T细胞不具有相关性。4.CD8阳性抗EBV特异性T细胞克隆的比例与其受体库波动程度呈正比，并且在症状严重患者外周血中比例升高，提示抗EBV CD8+ T细胞应答是其受体库波动的驱动因素。本课题的完成，对深入探索DIHS发病过程中TCR谱系特征及与临床的相关性，为该病预防、早期干预、疗效监乃至致免疫治疗研究提供新的理论和实验依据