CD40信号复合体新组分的鉴定与功能研究

CD40属于肿瘤坏死因子受体家族，是MAPK，NF kappa B通路，尤其是非经典NF kappaＢ 通路的重要激活子。其介导的信号通路不仅对免疫应答至关重要，而且与自身免疫性疾病，神经退行性疾病以及肿瘤等密切相关。CD40信号复合体组成及功能研究是阐明CD40引起的信号转导通路的前提和必要条件，也是CD40信号通路研究的热点方向。本研究前期工作应用质谱技术鉴定了CD40刺激10min形成的信号复合物新组分，其中包括1、MAPK通路中的重要激酶MKK1、MKK3、MKK4。2、PI3K 通路蛋白：p150PI3K，PLCγ；3、泛素化E2酶 NCUBE1；4：与细胞膜定位相关的蛋白质ERLIN2；5：其他蛋白激酶ROCK1，PKA等。本研究拟探讨复合体新组分在CD40引起的下游通路中所起的作用以及机制，为阐明CD40信号的转导与调控提供新的突破口。

细胞表面受体CD40属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）家族，是一种重要的免疫细胞共刺激因子受体。CD40介导的信号在免疫应答的过程中起着非常重要的作用。CD40与配体结合后，通过形成受体复合体激活下游多条信号转导通路，主要有NFB（包括经典通路和非经典通路）, MAPK（主要是p38, JNK）和PI3K等，最终实现其生物学效应。信号复合体中的蛋白质直接参与了下游信号转导，不同通路之间的交叉，以及信号分子之间的相互调节，信号复合体组成及功能的研究是阐明CD40引起的信号转导通路的前提和必要条件。.本研究通过免疫共沉淀法对CD40刺激10分钟时所形成的受体复合体进行了分离，用串联质谱鉴定到了一些可能参与复合体功能和调节的蛋白质。其中有很多与信号转导密切相关的分子。1、MAPK通路中的重要激酶MKK1、MKK3、MKK4。2、PI3K 通路蛋白：p150PI3K，PLC；3、泛素化E3酶NEDD4，4、泛素化E2酶NCUBE1)；4、其他蛋白激酶ROCK1，PKA等。我们进一步对鉴定到这些信号复合体组分进行了验证和功能研究。发现泛素化E3连接酶和NEDD4和激酶ROCK1与CD40具有相互作用，而其相互作用均不依赖于陪体刺激。我们应用CD40信号通路敏感的细胞系以及NEDD4敲除的B淋巴细胞对NEDD4在CD40信号通路以及其他免疫相关信号通路中的功能进行探索，发现NEDD4是CD40激活p38MAPK通路的负调节子。通过应用ROCK1的抑制剂Y27632，发现抑制ROCK1的活性可以抑制CD40引起的pJNK激活。进一步分子机制研究发现NEDD4能够与CD40信号复和体中重要的接头蛋白TRAF3和IKK发生相互作用并调节其泛素化修饰。 以上发现为进一步阐明CD40信号通路的调节机制提供了重要线索。