DOC-1R调节CDK2活性参与小鼠卵母细胞MII期阻滞的机制研究

DOC-1R为小鼠卵母细胞减数分裂调节因子，参与MII期纺锤体形态结构的维持。在前期体外培养细胞中我们发现，DOC-1R结合CDK2蛋白并下调其表达，提示DOC-1R可能通过卵母细胞MII期重要调控因子CDK2调节MII期阻滞过程。本项目将采用显微注射、定点诱变及体外磷酸化分析等方法，确定小鼠卵母细胞减数分裂MII期中DOC-1R过表达及沉默对CDK2活性的影响，阐明DOC-1R通过调节CDK2活性参与卵母细胞MII期阻滞过程的作用及其分子机制,明确ERK2磷酸化DOC-1R对其调节CDK2活性及MII期阻滞能力的影响，从而在分子水平及细胞水平探讨DOC-1R在卵母细胞MII期阻滞过程中的作用。本项目的完成将有助于加深对哺乳动物卵母细胞成熟机制的了解，并为不孕等相关疾病机理的研究奠定理论基础。

DOC-1R为小鼠卵母细胞减数分裂调节因子，参与MII期纺锤体形态结构的维持。在前期体外培养细胞中我们发现，DOC-1R结合CDK2蛋白并下调其表达，提示DOC-1R可能通过卵母细胞MII期重要调控因子CDK2调节MII期阻滞过程。在本项目中通过抗体显微注射等方法，我们检测到当DOC-1R蛋白被干扰时，小鼠卵母细胞突破GV期阻滞的过程没有受到明显影响，而第一极体排出时间显著提前，表明DOC-1R通过调节小鼠卵母细胞MII期阻滞进程参与卵母细胞的成熟过程。此外，我们的分析结果表明，DOC-1R负性调节CDK2激酶活性，这种负性调节作用是通过两个方面实现的：一方面，DOC-1R在RNA水平及蛋白质水平下调了CDK2的表达，p53/p21信号途径及经典Wnt信号通路参与上述过程的调节；另一方面，DOC-1R通过结合CDK2抑制了CDK2与其调节亚基周期素A与E的结合，从而影响了CDK2的活化过程。此外，我们的研究结果还表明，DOC-1R以其中央氨基酸区域结合CDK2，CDK2与DOC-1R的结合不依赖于CDK2结合周期素蛋白的保守区域——PSTAIRE基序。本研究的结果证明了DOC-1R为哺乳动物卵母细胞成熟的重要调节因子，并通过探讨DOC-1R调节CDK2活性影响细胞周期过程挖掘了其分子机制，为深入研究DOC-1R在细胞周期及生殖过程中的生物学功能及作用途径奠定了基础。