杜仲雌激素活性成分促进内皮祖细胞介导的心肌缺血组织损伤修复作用研究

动员骨髓内皮祖细胞(EPCs)促进血管发生开辟了治疗缺血性心脏病的新途径。雌激素在EPCs介导的缺血组织损伤修复中发挥重要作用，鉴于应用雌激素存在副作用，从中药中开发安全有效的植物雌激素类新药极具应用价值。本研究采用以雌激素活性检测为导向的中药化学成分系统分离的方法，在发现杜仲含有多种雌激素活性成分的基础上，首先通过体外实验即分离培养野生型、雌激素受体α、β基因敲除小鼠骨髓来源的EPCs，研究杜仲雌激素活性成分单独及多成分组合对EPCs功能（增殖、迁移、粘附、血管形成）的影响及其分子机制；之后，利用接受来源于野生型和雌激素受体基因敲除小鼠骨髓移植及去势后心肌缺血动物模型，研究富含雌激素活性成分的杜仲提取物对EPCs介导的心肌缺血组织损伤修复作用及机理。为中药杜仲及其提取物合理应用于缺血性心脏病的治疗提供实验依据，也为具有植物雌激素样作用中药的开发提供思路和方法。

动员骨髓内皮祖细胞(EPCs)促进血管生新开辟了治疗缺血性心脏病的新途径。雌激素在EPCs介导的心脏缺血组织损伤修复中发挥重要作用，鉴于应用雌激素存在副作用，从中药中开发安全有效的植物雌激素类新药极具应用价值。本研究采用以雌激素活性检测为导向的中药化学成分系统分离的方法，发现了中药杜仲中7种雌激素样活性成分。以体外培养的野生型(WT)、雌激素受体基因敲除（ER KO）、雌激素受体β基因敲除（ERβ KO）小鼠骨髓来源的Lin-为模型，研究了上述杜仲中多种雌激素活性成分对Lin-细胞38个关键功能基因表达的影响。研究发现桃叶珊瑚苷、汉黄芩素、千层纸素A对细胞增殖与凋亡、迁移与粘附功能基因表达具有调节作用，并进一步通过功能实验证实桃叶珊瑚苷可促进野生型小鼠Lin-细胞增殖，该作用由ERα介导。应用接受GFP小鼠骨髓移植的野生型小鼠MI模型研究发现桃叶珊瑚苷可增加从骨髓动员并归巢到缺血心肌的内皮祖细胞的数量，促进新生血管形成，增强小鼠心功能，减小心肌梗死面积，其作用机制与增强ER表达，增强EPC eNOS信号通路有关。应用去势合并后下肢缺血WT、ERKO、ERβ DKO小鼠模型研究证实桃叶珊瑚苷可增强野生型小鼠缺血组织血流恢复，其作用与增强肌肉组织VEGF、KDR、p-eNOS有关，而在ERKO、ERβ KO小鼠中作用减弱或消失。应用离体血管环、内皮细胞 、平滑肌细胞为模型研究表明千层纸素A和汉黄芩素均可以舒张血管，汉黄芩素可通过ERα信号通路上调eNOS表达水平，而在脂多糖刺激的血管平滑肌细胞中，可通过ERβ信号通路抑制iNOS表达从而发挥血管保护作用。总之，本研究表明杜仲中多种雌激素活性成分可以通过雌激素信号通路作用于EPC以及内皮和平滑肌细胞发挥血管保护、促新生血管形成及促缺血组织损伤修复作用。为中药杜仲合理应用于缺血性心脏病的治疗提供实验依据，也为具有植物雌激素样作用中药的开发提供思路和方法。