miR-182通过抑制Smad7负反馈机制诱导慢性鼻窦炎上皮间质转化的作用和机制

Epithelial-mesenchymal transition represents the key pathological characteristics of chronic sinusitis, but the underlying mechanisms remain unclear. In the preliminary experiments, we found increased expression of TGF-β and decreased Smad in CRS, and identify smad7 as the target of miR-182 by using TargetScan database. Since TGF-β/ Smad pathway has been identified as the key pathway to induce EMT, we thus hypothesize that miR-182 may activate TGF-β/ Smad pathway to induce EMT and subsequently promote the pathogenesis of CRS by targeting smad7. To address this issue, we plan to examine the effect of miR-182 on activation of TGF-β/ Smad pathway and EMT induction, clarify the association of miR-182 and smad7 and the regulatory mechanism how miR-182 promotes EMT in CRS through TGF-β/ Smad pathway by using plasmid transfection, siRNA interference, luciferase dual-reporter assay, etc. This project is hopefully to uncover the mechanism how miRNAs contributes to the pathogenesis of CRS and provide novel molecular target for biological treatment of CRS.

上皮基质转化（EMT）是慢性鼻窦炎（CRS）的基本病理学特征，但其机制不明。在实验研究中我们发现，CRS组织中TGF-β表达上调，而Smad7表达下调。采用TargetScan软件进行靶基因预测发现smad7基因是miR-182的作用靶点。鉴于TGF-β/ Smad通路是诱导EMT的关键信号通路，我们假设，miR-182可能通过靶向smad7基因导致TGF-β/Smad通路活化而诱导EMT形成，进而促进CRS的发生。为此，本项目拟通过质粒转染过表达、siRNA干扰、双荧光素酶报告基因等方法，验证miR-182对上皮细胞TGF-β/Smad通路的活化作用及对上皮EMT的诱导效应；明确miR-182与靶基因smad7之间的关系；阐明miR-182通过TGF-β/Smad通路诱导CRS的EMT形成机制。本研究有望揭示miRNAs参与CRS形成的分子机制，为CRS的生物学治疗提供新的干预靶点。

慢性鼻窦炎（CRS）是耳鼻喉科最为常见的慢性炎症性疾病之一，对患者生活质量和经济负担造成了严重影响。由于对其发病机制的认识有限，目前尚缺乏有效的精准治疗手段。.上皮间质转化（EMT）在哮喘以及下呼吸道炎症中的作用已经得到广泛研究，并已明确其和气道重塑密切相关。本研究通过免疫组化、qPCR等方法检测EMT标志物从而验证了在鼻黏膜慢性炎症中存在EMT 现象。同时也明确了miR-182在CRSwNP鼻黏膜组织中较正常对照高表达，并通过对多种呼吸道上皮细胞系进行 miR-182 基因的过表达和敲低，探究了 miR-182 对气道上皮EMT 的调控作用，即miR-182促进上皮细胞EMT，提示miR-182可能在CRSwNP发病过程中起重要作用。体外细胞学实验还明确了miR-182能促进TGF-β1介导的EMT, 利用敲除miR-182的动物进行慢性炎症造模研究进一步验证了miR-182的缺失对 HDM 引起的气道慢性炎症有抑制作用，更为直观地验证了其在CRS发病中的促炎作用，对于临床治疗有很好的借鉴意义。先前通过软件预测出miR-182的作用靶基因为Smad7,本研究也通过体外细胞学实验进行验证,发现miR-182过表达的上皮细胞中Smad7 蛋白表达降低，但Smad7并非是影响上皮细胞EMT的关键因子。这为探究慢性鼻窦炎EMT相关机制研究提供了新思路，也提示我们尚需寻找其它与 TGFβ1 相关的 miR-182 下游因子及相关炎症通路来对研究进行完善，也为探寻鼻部慢性炎症的精准化治疗手段奠定了一定的基础。