MicroRNA-148a通过调控上皮间质转化抑制肝癌转移的机制

新近研究表明：上皮间质转化（EMT）与肝癌易发生转移相关。因此，阐明调控肝癌细胞EMT的分子机制是亟待解决的科学问题。我们发现：miR-148a可降低肝癌细胞的迁移能力，分子机制研究发现miR-148a可促进肝癌细胞E-钙粘蛋白表达上调、波形蛋白表达下调，抑制基质金属蛋白酶-2的活性及应力纤维的形成，提示miR-148a可抑制肝癌细胞发生EMT，但确切机制尚不清楚。本项目拟利用miRace实验和生物信息学预测寻找miR-148a的靶标，分析靶标对EMT的调控及靶标之间在信号通路上的联系，阐明miR-148a抑制EMT的信号网络；利用动物模型，观察miR-148a对肝癌细胞原位成瘤及肺转移能力的影响；并在临床肝癌标本中验证miR-148a抑制EMT的信号网络并分析其临床意义。研究结果将揭示miR-148a在肝癌发生发展中的作用机制，探讨miR-148a作为临床防治肝癌靶标的可能性。

肝癌是我国最常见和预后最差的恶性肿瘤之一，肿瘤转移是导致肝癌患者死亡的首要因素。上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）是指上皮细胞转化为具有间质表型细胞的生物学过程。新近研究表明：EMT与肝癌易发生转移显著相关。因此，阐明调控肝癌细胞发生EMT的分子机制是肝癌转移机制研究的关键科学问题。microRNA（以下简写为miRNA）是一类广泛存在的小分子非编码RNA家族，参与细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等各种表型，其异常改变是肿瘤中常见的现象。我们发现，miR-148a在肝脏中表达丰富，与正常肝组织相比，miR-148a在肝癌组织中的表达显著下调，在有门静脉癌栓的肝癌组织中的表达更低，但miR-148a在肝癌转移中的作用及机制尚不清楚。体外细胞模型和裸鼠肝原位成瘤及肺转移模型提示：miR-148a可抑制肝癌细胞在体外的迁移能力，也能抑制肝原位成瘤的SK-Hep-1细胞发生肺转移。肝癌组织中miR-148a的表达水平与上皮细胞的标记E-cadherin的表达呈正相关，提示miR-148a可能调控EMT。细胞实验结果表明miR-148a可促进肝癌细胞上皮细胞分子标记E-cadherin的表达，下调间质细胞标记N-cadherin、Fibronectin 或 Vimentin的表达。机制研究发现，miR-148a可与肝细胞生长因子受体Met的3’UTR结合，下调Met的表达，继而抑制Met信号下游AKT的激活及GSK-3的磷酸化，并抑制Snail的表达及入核定位，调控EMT和肝癌转移。本研究揭示miR-148a在EMT及肝癌转移中的作用及意义，可为肝癌转移提供新的理论基础。