高血压时内源性哇巴因介导中枢对外周交感神经活动调节机制的研究

Long-term salt diet increases the level of Na+ in cerebrospinal fluid (CSF) and plasma, and evoked the ouabain (EO) secretion from the central and adrenal, which is the key junction between center and peripheral. It has been reported that renin-angiotensin system (RAS), reactive oxygen species (ROS), neurotransmitters (NT) and nuclear transcription factor-κB (NF-κB) in paraventricular nucleus of hypothalamus (PVN) play important role in the development of hypertension. But how ouabain (EO) as a key point regulates the sympathetic activity and blood pressure via the central and peripheral organs is unclear. Therefore, this study aims to explore whether the EO secretion from central and adrenal can trigger the RAS, ROS, NT and NF-κB, and the RAS, ROS, NT and NF-κB in centre have an effect on the EO secretion in sympathetic activity and blood pressure in the salt-induced hypertension via the molecular biological technique including wireless telemetry system, immunohistochemistry, Western blotting and RT-PCR. The significance of this project is to clarify the exact mechanism of EO in the development salt-induced hypertensive rats. It is hopeful to provide a novel drug target for hypertension clinical treatment and treatment strategies.

长期的高盐饮食会引起脑脊液(CSF)和血液中Na+浓度升高，诱发中枢以及肾上腺分泌哇巴因(EO)，而哇巴因作为连接中枢以及外周的关键点，对高盐诱导的高血压时下丘脑室旁核肾素-血管紧张素系统(RAS)、活性氧簇(ROS)、神经递质(NT)以及NF-κB是如何调节高血压时外周交感神经活动以及血压的机制我们尚不清楚。因此，本研究以高盐诱导的盐敏感性高血压大鼠为模型，通过无线遥测系统、免疫组化、Western blotting、RT-PCR等分析生物学方法，旨在探讨高盐诱导的高血压时哇巴因是否通过引起下丘脑室旁核RAS、ROS、NT以及NF-κB发生改变调节外周交感神经活性，而肾上腺释放的哇巴因是否又能够作用于中枢核团，引起RAS、ROS、NT以及NF-κB的改变，明确哇巴因作为结合中枢与外周重要关键分子参与高盐诱导的高血压的发病机制。本研究将为高血压的临床治疗提供新的治疗靶点和理论依据。

长期高盐饮食会引起脑脊液(CSF)和血液中Na+水平的升高，以及内源性哇巴因的改变，我们前期研究发现高血压时下丘脑室旁核Na+/K+-ATP酶参与血压与外周交感神经活动的调节，而具体作用机制尚不清楚。因此，本研究将分为三部分对下丘脑室旁核内源性哇巴因参与高血压发生发展的作用机制进行探讨。第一部分研究发现，随着给予正常大鼠双侧室旁核NaCl和哇巴因浓度逐渐升高，平均动脉血压升高，下丘脑室旁核内源性哇巴因(Ouabain-like compounds, OLC)的水平随之升高，Na+/K+-ATPase活性减弱，ADP/ATP比值降低，超氧化物歧化酶(SOD)的活性减弱，但NF-κB活性增加，由此我们推测室旁核不断增加的NaCl能够引起血压升高，OLC水平的增加，Na+/K+-ATaseP活性被降低，引起炎性反应和氧化应激反应。同时，我们观察到当哇巴因的浓度为1.5μmol/mL的时候，Na+/K+-ATPase（NKA）的三个亚基(α1、α2和α3)中NKA α2的表达相较于对照组显著增加，因此我们推测，下丘脑室旁核高水平的哇巴因能够抑制Na+/K+-ATPase的活性，增加NKA α2的表达，升高血压。第二部分的研究我们观察了正常大鼠和高盐诱导的高血压大鼠下丘脑室旁核Na+/K+-ATPase（NKA）的三个亚基(α1、α2和α3)的表达，结果显示，下丘脑室旁核NKA α2表达同样显著增加，OLC的水平升高，Na+/K+-ATPase活性减弱，ADP/ATP比值降低，NF-κB和NAD(P)H 酶的活性增加，明确了室旁核NKA α2参与了高盐诱导的高血压的发生发展。第三部分我们通过慢性给予高盐诱导的高血压大鼠双侧室旁核Na+/K+-ATPase α2腺相关病毒载体shRNA(shRNA α2)，观察了NKA α2的表达，检测了氧化应激相关指标以及相关信号通路分子PKCγ、p-Rac1的表达情况，炎性细胞因子以及相关信号通路分子TLR4、MyD88、NF-κB p65的表达。明确了高盐诱导的高血压能够通过Na+/K+-ATPase α2激活TLR4/MyD88/NF-κB依赖的炎性反应，以及PKCγ/p-Rac1/NAD(P)H依赖的氧化应激，最终引起交血压升高。本研究将为高血压在中枢调节机制方面补充内源性哇巴因作用新的观点，拓宽高血压的预防、治疗以及研究思路。