体细胞克隆牛Dlk1-Gtl2印记区域表观遗传重编程的研究

供体核表观遗传修饰的不完全重编程是造成克隆效率低和克隆动物发育异常的主要原因。基因组印记是由等位基因表观遗传修饰的不对称导致的，因此，基因组印记是研究核重编程的很好材料。我们在研究中发现Gtl2印记基因在体细胞克隆牛组织中表达紊乱，Dlk1-Gtl2印记区域在胚胎发育过程中起非常重要的作用，然而由于缺少基因序列以及多态性信息，Dlk1-Gtl2区域在牛中印记的分子机制以及在体细胞克隆牛中的重编程还没有被研究。本研究拟以牛Dlk1-Gtl2印记区域为研究对象，寻找有价值的SNP信息，从DNA甲基化水平、组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化三个方面揭示Dlk1-Gtl2区域在牛中印迹的表观遗传修饰机制；分析Dlk1在体细胞克隆牛中的表达状态；揭示Dlk1-Gtl2印记区域在体细胞克隆牛中表观遗传重编程情况，寻找克隆牛发育异常的重要原因，为提高体细胞克隆效率提供新的思路。

供体核表观遗传修饰的不完全重编程是造成克隆效率低和克隆动物发育异常的主要原因。基因组印记是由等位基因表观遗传修饰的不对称导致的，因此，基因组印记是研究核重编程的很好材料。本研究中，我们以牛的Dlk1-Gtl2印记区域为研究对象，首先克隆得到了了Dlk1和Gtl2基因的cDNA全序列，分析了Dlk1和Gtl2在自然繁殖牛和体细胞克隆牛中的印记状态；利用亚硫酸氢盐测序法对Dlk1-Gtl2印记区域的3个DMR区（Gtl2 DMR、IG-DMR和Dlk15′启动子）在体细胞克隆牛中表观遗传重编程机制进行了分析；并分析了体细胞克隆牛IG-DMR染色体特异的甲基化状态。除完成以上内容外，我们还对Dlk1-Gtl2印记区域的另一个母源表达的印记基因Meg8基因进行了研究，首先克隆得到了了Meg8基因的cDNA全序列，分析了Meg8基因的组织特异性表达；确定了Meg8基因在自然繁殖牛和体细胞克隆牛中的印记状态；并利用亚硫酸氢盐测序法对Meg8基因内含子上的CpG岛进行了染色体特异的甲基化分析。以上研究结果将为揭示Dlk1-Gtl2印记区域在体细胞克隆牛中表观遗传重编程机制，寻找克隆牛发育异常的重要原因，为提高体细胞克隆效率提供新的思路。