多功能蛋白PSF抑制IL-4/STAT6转录活性的分子机制

IL-4/STAT6异常活跃及靶蛋白IgE过度分泌与I型超敏反应密切相关，因此研究IL-4/STAT6调控IgE基因转录和表达机制有重要意义。本课题组一直从事相关研究，发现了STAT6转录激活复合物的组成成员，近期又发现IL-4刺激后，可诱导多功能蛋白PSF（多聚嘧啶区结合蛋白相关剪接因子）与STAT6结合，过量表达PSF可抑制STAT6介导的IgE基因转录。本项目在前期基础上，利用EMSA、ChIP、免疫共沉淀、免疫荧光等技术深入探讨IL-4刺激后PSF与STAT6在细胞内结合、定位分布及磷酸化修饰情况；PSF抑制STAT6/IgE基因转录的机制：作为抑制因子招募HDAC（组蛋白去乙酰化酶）到STAT6转录复合物上，通过（组）蛋白去乙酰化修饰改变染色质结构；还是直接与STAT6的DNA结合片段结合，阻止STAT6识别启动子DNA。另外，深入探讨PSF与STAT6有效结合的功能片段。

在本项目前期的研究工作中，我们通过质谱分析技术发现了一个这样的转录抑制因子： PSF (PTB-associated splicing factor, 多聚嘧啶区结合蛋白相关剪接因子)，它是 Hela 细胞受到IL-4刺激后，因为与 GST-STAT6-TAD结合而被我们发现的。. 在此项目的研究过程中，我们发现PSF与STAT6蛋白呈现共定位，通过STAT6的TAD结构域与STAT6 蛋白相互结合，该结合是 PSF 蛋白发挥对 IL-4/STAT6 基因转录抑制作用的结构基础。IL-4 诱导 STAT6 与 PSF 酪氨酸磷酸化是二者结合的先决条件。虫荧光素酶检测发现，PSF 负调控STAT6 基因转录活性。进一步的结果显示， PSF负调Ige基因的转录水平。 染色质免疫沉淀实验发现细胞内不同表达水平的 PSF 影响 STAT6 与 Ige启动子结合能力。由此我们得出以下结论，IL-4 刺激后 PSF 对 STAT6 信号传导通路进行负性调控，即 IL-4刺激后PSF是STAT6通路的转录抑制因子，且该抑制作用具有IL-4配体的依赖性。.