LRP16基因在NF-kB调控动脉粥样硬化信号传导途径中作用的研究

在动脉粥样硬化斑块的形成过程中，NF-kB信号通路发挥着关键的调节作用。既往的研究多集中在NF-kB核转位的信号调控，而近年来越来越多的研究致力于对其核内转录活性调控机制的探讨。我们研究组发现LRP16可通过与p65直接的相互作用增强NF-kB介导的信号活性。本项目将细化研究LRP16/NF-kB相互作用的分子表位；阐明LRP16在细胞核内调控NF-kB信号通路的分子机制；确证LRP16在动脉粥样硬化各环节中起重要作用的细胞系中对NF-kB活性的调控作用及LRP16发挥的生物学效应，并分析不稳定心绞痛患者和正常对照人群静脉血单个核细胞中LRP16和NF-kB表达的相关性。

动脉粥样硬化是慢性炎症性疾病，NF-kB信号通路在调控炎症反应中起着重要作用，研究发现NF-kB信号通路的异常激活与动脉粥样硬化疾病的发生发展有密切关系。尽管决定NF-kB从细胞浆到细胞核转位的分子机制已被广泛报道，对于细胞核内NF-kB活性的调控机制尚部十分清楚。在本课题中，我们主要研究了LRP16对NF-kB活性的调控作用，及其与动脉粥样硬化的相关性。研究结果显示，.1.LRP16通过与p65相互作用参与NF-kB转录复合体的形成。LRP16可以与p65相互作用，且两者的相互作用主要通过LRP16的C端与p65的N端介导，而这也正是Macro Domain与Rel 同源结果域所在的位置。免疫荧光实验结果显示，在受到TNF-a刺激后，p65入核，并与LRP16形成共定位，提示LRP16可能通过与p65在细胞核内产生相互作用而参与NF-kB转录复合体。.2.过表达LRP16并不能显著改变内源性NF-kB的活性。尽管过表达LRP16 显著上调细胞因子诱导的kB-luc活性，但并没有明显改变TNF-a诱导的NF-kB下游靶基因mRNA表达水平和NF-kB与DNA的结合能力。.3.抑制LRP16的表达降低了NF-kB的转录活性和其与DNA的结合能力。通过RNA干扰技术沉默细胞中内源性LRP16的表达可以减低NF-kB活性并明显下调NF-kB下游靶基因。机制研究显示沉默LRP16表达并不影响TNF-a诱导的NF-kB核转位，但能影响细胞核中NF-kB/p300/CREB功能转录复合体的形成和稳定，并显著降低TNF-a诱导的NF-kB调控下游靶基因的表达。.4. LRP16在粥样硬化斑块的新生血管中表达。LRP16表达的主要阳性部位在粥样硬化冠状动脉的新生血管内皮细胞，过表达LRP16促进了内皮细胞的增殖，而对TNF-a诱导的细胞凋亡没有明显影响，但是抑制LRP16表达以后可以明显增加内皮细胞对TNF-a诱导细胞凋亡的敏感性，增加细胞凋亡率。.5. LRP16在冠状动脉粥样硬化的形成发展中发挥重要作用。急性冠脉综合征(ACS)组和稳定型心绞痛(SAP)组的LRP16 mRNA均高于对照组，多支病变组LRP16 mRNA水平明显高于单支病变组和正常对照组，LRP16表达与总胆固醇和低密度脂蛋白呈直线相关，但与Gensini积分无相关性。