子宫内膜异位症血瘀证的特异性蛋白组学研究

子宫内膜异位症（endometriosis ，EMT）为生育年龄妇女临床常见疑难疾病，针对EMT西医发病机制复杂，中医辨证缺乏规范化、客观化的辨证标准，临床治疗难、易复发的问题，在前期相关实验研究和中医辨证规律文献和临床研究基础上，采用蛋白质组学双向凝胶电泳和新型质谱分析技术，对EMT血瘀证及相关主要复合证（肾虚血瘀证、气滞血瘀证）患者异位和在位内膜组织及血清，与正常妇女在位内膜及血清进行差异蛋白的比较研究，寻找不同证候的特异性蛋白质标志物，并对其进行分析鉴定。.通过本研究为EMT中医证候蛋白质库的建立奠定基础，以此探索EMT血瘀证及相关复合证的特异性指标，从蛋白质水平探索EMT不同证候的实质、演变规律和辨治靶点，为EMT中医证候特异性指标的筛选及规范化、客观化辨证标准的建立提供实验依据，以建立EMT的辨证标准，提高辨证治疗的准确性，通过"治病求本"，实现"源头治疗"，以提高临床疗效。

研究背景：子宫内膜异位症（Endometriosis，EMT）是育龄妇女的多发病，严重影响女性生殖健康和生活质量。证候是疾病一定阶段病因、病位、病性、病势的综合表现，是中医药理论研究的核心内容，开展中医“证”本质研究，揭示证候的科学内涵是中医基础理论现代化的关键环节，而证候生物学基础研究的突破则是证候科学内涵得以阐明的保障。血瘀证是中医临床各科的基本证型，也是子宫内膜异位症的常见证型。在前期研究中，我们发现该证型的异位和在位内膜在组织形态学和细胞凋亡相关因子的表达存在差异，为从蛋白组学水平探索EMT的不同证候的特异性标志物的研究工作奠定了基础。对子宫内膜异位症血瘀证进行深入、系统的现代研究，有助于对本病的准确诊断和有效治疗。目的：①通过蛋白组学技术分离并鉴定EMT血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者在位和异位内膜的差异蛋白质，寻找EMT证候特异性蛋白质；②从蛋白质水平探讨EMT血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证的实质，揭示EMT血瘀证辨证的分子生物学基础，建立EMT的蛋白质分子微观辨证和诊断体系，探讨EMT证候的演变规律、证候的辨治靶点，寻找有意义的分子标记物及基因干预的靶点。方法：取6例子宫内膜异位症血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证患者增生期在位和异位内膜组织和6例增生期正常子宫内膜组织标本，将各种型的每两例标本进行等量混匀，得到3组标本并提取组织总蛋白。通过双向电泳技术得到3组双向电泳凝胶图谱。检测出的表达差异点经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOF/MS）及蛋白质数据库检索进行蛋白质鉴定。结果：在3组差异蛋白中进行比较，最终得到三次重复试验所获得的各证型的差异蛋白。其中血瘀证在位内膜差异蛋白2个，异位内膜差异蛋白1个。肾虚血瘀证在位内膜差异蛋白3个，异位内膜差异蛋白3个。气滞血瘀证在位内膜差异蛋白3个，异位内膜差异蛋白4个。根据各证型差异蛋白比较，我们可以发现膜联蛋白在肾虚血瘀证在位内膜和异位内膜均有高表达，肌球蛋白轻链3在气滞血瘀证在位内膜和异位内膜均有高表达。结论：EMT血瘀证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证之间蛋白质组成分存在差异，这些差异可能是证候实质的内在根源。这些差异蛋白可能成为EMT不同证候发病的候选生物标志物。