桂枝茯苓丸治疗血瘀证子宫内膜异位症药效物质基础及作用机制研究

Guizhifuling Wan (GFW) is a classic prescription of Endometriosis syndrome (EMs) in clinic. Based on the pre-research of GFW for Treatment of EMs, in this work, we carried out research as follows: ① evaluate the essence of EMs disease, blood stasis syndrome and combination of animal models and evaluate the intervention role of GFW based on metabolomics; ②endocrine - immune - the blood biological network to evaluate the GFW pharmacological effect, and to investigate the action mechanism; ③quickly locate the basis of the substances in the body of the GFW treatmentfor EMs using serum pharmacochemistry of TCM; ④activity screening the in vivo constituents of cell model of EMs to determine the active ingredients; biological effects authentication of representation of active ingredients on whole animal model using metabolomics;⑤Based-systems biology research ideas, integrating metabolomics, biological effects, and serum pharmacochemistry results, clarifying the material basis and action mechanism of GFW, explaining the essence of formula - syndrome - disease, supporting for reasonable compatibility of prescriptions and innovation medicine research of TCM clinic; simultaneously, exploring a new model ' metabolomics - biological effects of network - combiningserum pharmacochemistry of TCM ' for the basic research of Chinese herbal formula.

桂枝茯苓丸(GFW)是治疗血瘀证子宫内膜异位证（EMs）的经典方剂，临床疗效确切，但药效物质基础尚不明确。本项目在GFW治疗EMs前期研究基础上，进一步采用系统生物学研究思路①以代谢组学方法对EMs病、血瘀证、病证结合动物模型和GFW干预作用进行评价，阐明病证本质及药物作用代谢靶点②以内分泌-免疫-血液生物效应网络，评价GFW药理效应，探讨作用机制；③通过GFW治疗血瘀证EMs模型的血清药物化学研究，快速定位体内物质基础；④以EMs细胞模型对血中移行成分进行活性筛选，确定有效成分；以整体动物模型对代表性活性成分进行代谢组学和生物效应验证。⑤整合代谢组学、生物效应、血清药物化学研究结果，阐明GFW药效物质及和作用机制，阐释方-证-病对应的科学本质，为中医临床遣药组方合理配伍和创新中药研究提供支撑；同时，探索以"代谢组学-生物效应网络-中药血清药物化学"相结合的中药复方药效物质基础研究新模式。

桂枝茯苓丸是治疗血瘀证子宫内膜异位症的经典方剂，临床疗效确切，但药效物质基础尚不明确。项目采用自体移植结合冰水浴法制备了寒凝血瘀型子宫内膜异位症模型，并应用组织形态学、病理学及血液流变学等方法对模型进行了验证，并从免疫、内分泌、血液生物效应网络阐明桂枝茯苓丸对寒凝血瘀证Ems的治疗作用。在此基础上，应用代谢组学方法，鉴定了寒凝血瘀型Ems模型的尿液（21个）、血液（13个）生物标记物，桂枝茯苓丸对各标记物均有不同程度的回调作用，反证了确定的标记物与寒凝血瘀型Ems相关，标记物主要涉及苯丙氨酸，酪氨酸、色氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和类固醇激素生物合成，酪氨酸、色氨酸代谢和苯丙氨酸代谢以及柠檬酸循环等代谢通路。应用中药血清药物化学方法，表征了桂枝茯苓丸全方的134个体外成分，在全方显效情况下分析并鉴定了35个血中移行成分；并以Ems细胞模型对主要代表性血中移行成分进行活性筛选，确定了可能药效物质基础；再将桂枝茯苓丸及主要代表性药效物质基础对Ems模型进行干预，从小分子代谢物及代谢途径角度阐明了治疗寒凝血瘀型Ems的作用机制。本研究应用中医方证代谢组的思路和方法，阐明了桂枝茯苓丸治疗寒凝血瘀型Ems的物质基础，并初步探讨了其作用机制，是其他中药复方及方证相关研究提供了一个借鉴和思路。