基于代谢酶活性的钩藤生物碱治疗阿尔茨海默病药效物质研究

以药物代谢理论为基础，基于"毒损脑络"的阿尔茨海默病(AD)病因假说，提出Ⅰ和（或）Ⅱ相代谢酶活性改变引起致AD疾病的毒性成分累积致病的设想。以HPCE、LC-MSn联用技术、cocktail探针底物技术为基础，进行复合型AD大鼠代谢酶活性、内源性成分变化研究，探索与AD相关的Ⅰ、Ⅱ相代谢酶。再进行钩藤生物碱成分制备、代谢规律研究及代谢产物成分的富集。采用相同的AD模型研究各成分的活性作用，明确药效物质成分；并探索多组分协同增效的作用规律，得到协同作用指数。确定钩藤生物碱成分- - AD的治疗效用- - 体内代谢酶活性的相关性，初步建立钩藤治疗AD的活性成分、代谢规律、药效作用三者联动的研究系统。验证因代谢酶活性改变导致AD的病因性成分变化的设想，阐明钩藤生物碱治疗AD的药效物质成分、代谢规律及其对代谢酶活性影响，为活性成分联合应用治疗AD提供研究基础。

本项目以药物代谢理论为基础，基于"毒损脑络"的阿尔茨海默病(AD)病因假说，以LC-MSn联用技术、cocktail探针技术为基础，研究钩藤生物碱代谢规律，研究原形及代谢产物活性，筛选治疗AD药效活性成分。并探索与AD相关的代谢酶，阐述钩藤生物碱组分对代谢酶活性的影响。研究发表核心论文4篇，会议论文1篇，投稿SCI论文2篇。.进行钩藤药材生物碱成分分析，完成24种生物碱类成分的UPLC-Q-TOF/MS鉴别及含量测定，其中吲哚类生物碱geissoschizine methyl ether，3β–isodihydrocadambine、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱和氧化吲哚类生物碱钩藤碱、异去氢钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱的含量较高。进行HPLC-UV法测定药材中6种生物碱成分及指纹图谱研究，完成薄层色谱鉴别、紫外-可见光谱分析、氮含量测定、无机元素含量测定、水分测定等药材质量评价研究。.进行钩藤生物碱组分提取、吸附树脂纯化及含量测定研究，完成生物碱提取物抗AD的药效作用研究，提取物具有改善AD大鼠记忆力、提高SOD抗氧化、抗乙酰胆碱酯酶作用。UPLC-Q-TOF/MS分析异钩藤碱及其代谢产物药动学，异钩藤碱及5-氧代异钩藤酸等代谢产物达峰时间在0.5～1.2h，消除半衰期t1/2在1.2～5.5h。进行异去氢钩藤碱代谢产物鉴别，其存在羟基化、异构化、氮氧化等代谢途径。钩藤生物碱成分还存在羟基化、脱甲基化等肠道菌群转化途径。.分离制得药材中12个生物碱成分及给药大鼠尿液中6个代谢产物，并进行了原形成分、代谢产物及含药血浆、脑组织液对ACHE抑制作用研究，异去氢钩藤碱、钩藤碱、卡丹宾碱、毛钩藤碱等成分具有较好的ACHE抑制作用，为钩藤抗AD的主要活性成分。.进行钩藤生物碱成分对代谢酶作用研究，建立CYP1A2、2C9、2E1、3A4代谢酶探针药物的HPLC-UV测定方法，D-半乳糖致AD模型大鼠的CYP2E1代谢酶活性降低、CYP1A2代谢酶活性增加；钩藤生物碱组分对AD模型大鼠CYP2E1有诱导作用、CYP1A2有抑制作用。对空白大鼠代谢酶及肝微粒体活性研究表明，钩藤药材诱导空白大鼠肝代谢酶CYP2E1，抑制代谢酶CYP1A2、3A4，对代谢酶CYP2C9无显著影响。