LncRNA AC092131.1 通过TPD52L2/Wnt/β-catenin调节胶质母细胞瘤EMT和复发的表观遗传学机制研究

In our previous study, we found TPD52L2 attenuation can promote EMT by activating the Wnt signaling pathway in glioblastoma, which in turn mediates the radiochemotherapy resistance of residual tumor cells after surgery. Based on LncMAP database, we found Lnc RNA AC092131.1 and SMARCC2 participate in the regulation of TPD52L2. The TCGA data suggested that the expression of Lnc RNA AC092131.1 and SMARCC2 mRNA was positively correlated with TPD52L2 mRNA expression, and the high expression of Lnc RNA AC092131.1 and SMARCC2 mRNA could significantly prolong the overall survival. Furthermore, sequence alignment revealed that there was a complementary sequence between them. Meanwhile, SMARCC2 is an important component of the SWI/SNF complex, which can regulate the tumor EMT status by affecting c-Myc levels. We have already demonstarte c-Myc is an important transcription factor to activate the TPD52L2 transcription. Based on the above results, this study aim to explore the mechanism of Lnc RNA AC092131.1 regulating TPD52L2 expression and Wnt/β-catenin pathway through SMARCC2 in vivo and in vitro, which further affect radiotherapy and chemotherapy resistance.

我们已发现在胶质母细胞瘤中，干扰TPD52L2能够激活Wnt信号通路促进肿瘤细胞发生EMT，进而介导术后残留的肿瘤细胞产生放化疗抵抗。基于LncMAP数据库预测发现Lnc RNA AC092131.1和SMARCC2参与TPD52L2上游机制的调控。且TCGA数据提示Lnc RNA AC092131.1和SMARCC2 mRNA表达量与TPD52L2 mRNA表达呈正相关，且两者高表达能显著延长患者总体生存期。进一步的序列比对发现两者存在一段互补序列，且前期发现c-Myc可以作为转录因子激活TPD52L2转录过程。而SMARCC2作为SWI/SNF复合物的重要元件，SWI/SNF可以通过影响c-Myc水平调节肿瘤EMT状态。基于上述结果，本课题拟从体内和体外实验探明Lnc RNA AC092131.1通过SMARCC2调节TPD52L2表达进而影响胶质母细胞瘤放化疗抵抗和复发的具体机制。

胶质瘤是最常见的中枢神经系统肿瘤类型。SWItch/蔗糖不可发酵（SWI/ SNF）是一种肿瘤抑制剂，在上皮 - 间充质转化（EMT）中起重要作用。本研究旨在确定参与EMT过程的关键分子。SWI / SNF相关，基质相关，染色质亚家族c成员2（SMARCC2）的肌动蛋白依赖性调节因子在多种类型的癌症中发生突变，并且其表达率低。SMARCC2是染色质重塑复合物SWI / SNF的核心亚基。通过逆转录定量PCR分析人胶质瘤组织中相对mRNA SMARCC2表达水平，而通过免疫组织化学染色测定蛋白质表达水平。SMARCC2的表达在胶质瘤细胞中使用小干扰RNA（si）敲低，并通过感染携带SMARCC2 cDNA的腺病毒载体过度表达。分别进行伤口愈合和Transwell测定以评估细胞迁移和侵袭。随后，进行免疫荧光和蛋白质印迹以分析与SMARCC2相关的癌基因c-Myc的表达水平。SMARCC2与C-MYC结合以降低其表达。与生物信息学分析的结果一致，该分析显示，与高级别胶质瘤组织相比，SMARCC2的上调表达水平与胶质瘤患者的预后更有利相关，SMARCC2的mRNA和蛋白表达水平在低级别胶质瘤组织中显着上调。伤口愈合测定的结果表明，与阴性对照（NC）组相比，siSMARCC2-1/3组的细胞迁移显着增加。相比之下，与慢病毒载体 - 非特异性对照组（LVS-NC）组相比，腺病毒过度表达SMARCC2转导后细胞的迁移能力显着降低，其上调了SMARCC2的表达。Transwell测定结果进一步表明，与LVS-NC组相比，SMARCC2过表达显着抑制了U87MG和LN229细胞的迁移和侵袭能力。随后进行共免疫沉淀测定以验证SMARCC2和c-Myc的结合;结果表明，与LVS-NC转染细胞相比，腺病毒转染细胞中c-Myc的表达下调。免疫印迹实验结果表明，与LVS-NC组相比，N-钙粘蛋白、葡萄蛋白、蜗牛家族转录抑制因子1和β-连环蛋白的表达水平明显下调，而T-钙粘蛋白在SMARCC2细胞系中的表达水平明显上调。总之，本研究的结果表明，SMARCC2可能通过调节胶质瘤中c-Myc的表达来抑制Wnt / β-连环蛋白信号传导。SMARCC2通过介导癌基因C-MYC的表达来调节胶质母细胞瘤细胞系的EMT状态，以抑制其迁移和侵袭能力。