热敏灸膝关节骨性关节炎兔模型"犊鼻"穴的敏化效应及其机制研究

Previous studies showed that acupoint Dubi is the one of heat sensitive high risk appear area in knee osteoarthritis patients.And heat-sensitive moxibustion is the best choose of moxibustion, because moxibustion heat sensitive point is easy to stimulate the Qigan, so that gas can easily go to disease and we can improve the efficacy more. The chief problem of heat sensitive moxibustion’s basic research is the mechanism of points sensitive phenomenon. In this study, the clinical scientific research as the basis, infrared imaging technology as heat sensitive point detection method, heat-sensitive moxibustion knee osteoarthritis rabbit model in the acupoint Dubi as the intervention measures, and we can use Real time-PCR, Western blot, immunohistochemical, immunofluorescence technique and other technical means to observe the intervention effect of heat-sensitive moxibustion on knee osteoarthritis rabbit’s joint swelling, joint mobility and morphology, analysis is there has changing in the content of active substance such as 5-hydroxytrytamine, histamine,substance P, bradykinin and heat shock protein,and TRPV1 as the starting point of research and explore the sensitizing effect and mechanism of acupoint Dubi from periphery, spinal cord and hypothalamus levels,so that we can provide some experimental basis for heat-sensitive moxibustion’s clinical application and its theory scientific.

既往研究表明，“犊鼻”穴为膝关节骨性关节炎患者热敏高发穴区之一，热敏穴为灸疗最佳选穴，艾灸热敏穴极易激发经气感传，气至病所，更能提高临床疗效。腧穴敏化现象产生的机理是热敏灸基础研究的首要问题。本研究以临床科研为依据，以红外成像为热敏穴检测技术，以热敏灸膝关节骨性关节炎兔模型“犊鼻”穴为干预措施，运用Real time-PCR、Western blot、免疫组化、免疫荧光技术等多种技术手段，观察热敏灸对膝关节骨性关节炎兔关节肿胀、关节活动度及形态学的干预效应，分析致敏活性物质5-羟色胺、组织胺、P物质、缓激肽和热休克蛋白是否存在改变，以TRPV1为研究切入点，从外周、脊髓、下丘脑水平探讨“犊鼻”穴的敏化效应及热敏机制研究，为热敏灸的临床应用及其理论的科学化提供部分实验依据。

本课题前期研究发现热敏灸能抑制Ⅱ型胶原、蛋白多糖等物质降解而明显改善KOA兔软骨损害。热敏灸技术核心在于悬灸热敏腧穴，“犊鼻”穴为临床KOA患者热敏高发穴区之一，热敏腧穴为灸疗最佳选穴，艾灸热敏腧穴极易激发经气感传，气至病所，更能提高临床疗效。腧穴敏化现象产生的机理是热敏灸基础研究的首要问题。.按随机数字表法将新西兰兔随机兔分为空白组，假手术组，模型组，艾灸组。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15d，假手术组关节腔内注射等量的0.9% NaCl溶液。造模成功后，艾灸组艾灸“犊鼻”穴，每日1次，每次40 min，共7 d，根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组。热敏灸组随机分为CPZ（TRPV1拮抗剂）组、CAP（TRPV1激动剂）组、溶媒剂组、热敏灸对照组（即热敏灸组）。CPZ组、CAP组、溶媒剂组治疗前先在犊鼻穴区（0.5cm×0.5cm）处涂抹浓度为0.1% CPZ，0.5% CAP，及等量的溶媒，10分钟涂抹1次，共涂抹4次，之后继续艾灸40 min。非热敏灸组、热敏灸组同样艾灸40 min，空白组、假手术组、模型组不予干预措施。. 实验结束后检测各组数据，显示肥大细胞及炎性致敏物质5-HT、HA、SP、CGRP可能是犊鼻穴发生热敏化的物质基础，热敏腧穴处存在HSP70的含量变化。TRPV1是KOA兔犊鼻穴发生热敏化的关键靶点，热敏灸可能在脊髓、丘脑水平发挥调控治疗作用。此外热敏灸还可通过减少局部NGF的产生，从而抑制NGF/P38 MARK/TRPV1通路的激活，降低炎性局部的痛敏反应而发挥其改善KOA的作用。.本项目研究成果初步揭示了灸疗热敏的生物学基础，对丰富和发展腧穴敏化理论具有一定的作用，证实了热敏灸对改善KOA兔疼痛具有良好的干预调控作用，可促进热敏灸干预KOA在临床上的使用和推广，提高人民生活健康水平，具有十分重要的社会和经济意义。