乙肝病毒X基因突变体调控Wnt-5a参与肝细胞癌发生的作用机制

乙型肝炎病毒X基因（HBx）与肝细胞癌（HCC）的发生有密切关系，但其具体的分子机制仍不清楚。本课题前期研究发现肝癌组织内存在高频的HBx羧基端缺失突变，随后构建了HBx羧基端缺失突变体并转染HCC细胞，以全长HBx基因为对照进行了基因表达谱芯片筛选和蛋白质组分析，发现HBx羧基端不同缺失突变体分别在基因和蛋白水平调控Wnt-5a表达，免疫组化和Western Blot分析发现Wnt-5a在肝癌组织中低表达并相关于肿瘤差的预后。推测HBx基因突变体可通过调控Wnt-5a的表达，影响多种信号转导途径，共同参与HCC的发生发展。本课题拟应用基因共转染、SiRNA和染色质免疫共沉淀芯片等分子和细胞学技术，进一步探讨HBx基因突变体通过调控Wnt-5a的表达参与肝细胞癌发生的分子靶点和作用机制。研究结果对阐述乙肝病毒感染相关性肝细胞癌发生机制将具有重要的理论意义和潜在应用价值

我国是原发性肝细胞癌（HCC）高发区，乙肝病毒（HBV）是我国HCC发生的主要原因之一，其中乙肝病毒X基因（HBx）与HCC发生关系最为密切，但其具体的分子机制仍不清楚。本课题前期通过基因表达谱芯片筛选，发现Wnt5a水平变化与HBx突变体蛋白表达水平相关，进一步探讨HBx调控Wnt5a蛋白参与肝细胞癌发生的作用机制。主要研究结果如下：.1. 从40例肝癌病人的癌组织和癌旁组织筛选到HBx基因多个突变体，包括新的缺失突变体和既往我们报道的HBx128缺失突变体。对细胞生物学行为的观察提示，HBx128突变体，与野生型HBx相比，具有更强的致癌作用。.2. Chip-chip和LncRNA芯片结果显示，HBx缺失突变体与野生型HBx无论在结合的转录因子、DNA还是在转录水平的调控方面，均存在明确的差异。发现了一些令人感兴趣的基因，如PDK2、DEC1和MYCT1，尤其是MYCT1，免疫组化结果提示，其在细胞内定位的变化可能发挥不同的作用。相关内容未见报道。 .3. Wnt5a下调表达主要与HBx缺失突变相关，Wnt5a上调表达可抑制Huh7细胞的增殖和侵袭，相反，Wnt5a- SiRNA可促进Huh7细胞的增殖和移动。芯片结果显示，Wnt5a可能经由Wnt信号途径自身或Hedgehog等信号途径发挥作用。进一步的研究证实Wnt5a与HBx蛋白的相互作用关系并不是通过蛋白-蛋白水平上的调节发挥作用。. 综上所述，本研究初步揭示了Wnt5a在HCC发生中的作用机制及其与HBx蛋白间的关系，以及HBx突变体HBx128增强肝癌细胞增殖和迁移的作用机制，为治疗乙肝相关的肝癌提供了坚实的实验基础。已发表论著5篇，其中SCI收录4篇。