双荧光素酶标记的HCV复制体系的建立及其在体内外药物筛选中的应用

丙型肝炎病毒（HCV）是一种严重危害人类健康的病原体，目前还没有有效的疫苗和药物。由于缺乏合适的HCV复制和感染小动物模型，严重阻碍了抗HCV药物体内作用效果的评价。本项目拟构建包含报告基因萤火虫荧光素酶和HCV全长基因组的质粒。将此质粒转染稳定表达海蜃荧光素酶的Huh7.5细胞，建立能够支持HCV的复制并产生感染性颗粒的细胞体系。在此体系中，以萤火虫荧光素酶的活性反映HCV复制水平，以海蜃荧光素酶活性反映药物的细胞毒性。然后将此细胞原位移植到免疫缺陷小鼠肝脏内，通过活体内双荧光成像技术就可以实时监测HCV感染克隆在模型免疫缺陷小鼠体内的感染、复制过程以及对抗HCV药物的反应；实现抗HCV药物在体内的作用效果和毒性安全性的评价，为药物进入临床前提供基础资料。