补肾法改善慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的雌激素及其受体机制

绝经后女性慢性肾盂肾炎发病率远高于育龄女性，此与雌激素水平的降低有密切关系。同时，雌激素水平的低下可加重肾间质纤维化。但由于安全性等问题使雌激素应用受到限制，调节雌激素受体成为防治组织炎症和纤维化的一个重要环节。慢性肾盂肾炎在中医属劳淋，病机特点是肾虚为本。具有补肾作用的二仙汤虽无激素样物质，但具有雌激素样作用，能调节组织中雌激素受体，这可能是其改善慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的重要机制和途径之一。本课题拟应用不同月龄雌性大鼠慢性肾盂肾炎肾间质纤维化模型，检测肾组织中雌激素受体和α－SMA、TGF－β1、NF-κB的表达量，研究雌激素受体和肾间质纤维化的相关性，证实慢性肾盂肾炎的肾虚本质之一是生殖内分泌功能衰退的观点；并应用老年雌性慢性肾盂肾炎大鼠模型，研究二仙汤是否通过调节肾脏雌激素受体表达、从而改善慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的作用，通过补肾中药的作用环节来阐释肾精的物质基础及对肾脏的作用。

本课题应用不同月龄雌性大鼠慢性肾盂肾炎肾间质纤维化模型，检测肾组织中雌激素受体和α－SMA、TGF－β1、NF-κB的表达量，研究雌激素受体和肾间质纤维化的相关性，并应用老年雌性慢性肾盂肾炎大鼠模型，研究二仙汤改善慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的作用及机制。研究发现：（1）3月龄年轻大鼠，与13月龄老年大鼠比较，血清雌激素水平变化不明显，差别无统计学意义。3月龄年轻大鼠与13月龄大鼠肾组织雌激素受体α和β mRNA和蛋白，NF-KB mRNA等比较，差别无统计学意义。反复膀胱内灌注大肠埃希氏菌6周，13月龄大鼠在8周时αSMA mRNA大于6周时αSMA mRNA，差别具有统计学意义。（2）研究补肾中药二仙汤治疗慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的作用与机制：1）各组肾组织PAS及Masson染色提示，模型组纤维化程度增加，二仙汤等药物刺激后有不同层度下降。2）18月龄大鼠，血清雌二醇水平较正常组3月龄大鼠明显下降，给药后二仙汤组、雷诺昔芬组、补佳乐组及二仙汤+氟维司群组雌激素水平明显上升，差别有统计学意义。3）免疫组化、Real-Time PCR和Western Blot检测发现肾组织雌激素受体βmRNA和蛋白表达，与正常组大鼠比较，18月龄大鼠表达下降，分别予二仙汤、补佳乐、雷诺昔芬刺激后，有不同层度上升，雌激素拮抗剂氟维司群作用后，表达有所下降。雌激素受体α mRNA表达变化不明显。免疫组化和Real-Time PCR检测肾组织NF-KB mRNA，18月龄大鼠肾组织NF-KB表达增加，药物刺激后有不同层度下降趋势。4）Western Blot方法检测肾组织α-SMA及TGF-β蛋白表达，18月龄模型组上升明显，在二仙汤组、补佳乐组、雷诺昔芬组中，蛋白表达有不同程度下降。α-SMA表达各组之间无明显变化。结论：本研究从体内动物实验，进一步证实了二仙汤可以通过雌激素受体从而下调NF-KB表达，抑制TGF-β1和α-SMA纤维化因子的表达，从而起到抑制纤维化的作用。而雌激素受体拮抗剂-氟维司群则可以阻断二仙汤的类植物雌激素样作用，进一步证实了二仙汤的作用位点及机制。