HCV双顺反子复制子作为抗HCV药物筛选模型的研究

根据中国人HCV株序列设计引物，对HCV感染者血清进行长RT-PCR扩增，获得HCV NS3至NS5B长片断；通过序列分析，建立中国人HCV株共有序列；将该共有序列替代pNNeo/3-5B质粒的HCV序列，构建中国人HCV株选择性双顺反子亚基因组RNA复制子质粒；该质粒体外转录合成RNA，转染人肝癌细胞或其它细胞并进行G418筛选，对多个细胞集落的子代复制子序列分析，揭示适应性变异的特征及位点，将适应性变异引入亲代复制子，建立高水平复制的中国人HCV株RNA复制子模型。采用该模型，对多种单味或复方中药提取物进行抗HCV活性的高通量筛选，以期获得具有抗HCV活性的中药提取物。本研究为抗HCV药物的开发提供了一个新途径；并对中国人HCV株的体外复制机理及细胞致病机理的研究具有重要意义；同时，抗HCV活性中药提取物的高通量筛选，将为抗HCV活性先导化合物的研究奠定基础。