体内成像监测载HCV抗原树突状细胞疫苗的体内转归及其诱导的抗病毒作用

丙型肝炎病毒（HCV）是一种严重危害人类健康的病原体，目前还没有有效的疫苗和药物。由于缺乏合适的HCV复制和感染小动物模型，严重阻碍了宿主免疫细胞与HCV相互作用研究以及免疫效应细胞体内抗病毒效果评价。对此本项目拟构建报告基因萤火虫荧光素酶（Fluc）标记的HCV基因组表达载体，通过水动力转染建立Fluc-HCV基因组小鼠肝脏表达体系。体外分离小鼠树突状细胞（DCs）、培养、扩增、负载病毒特异性CTL表位，并进行Gaussia荧光素酶标记。将此标记的载病毒特异性抗原DCs疫苗输注入表达Fluc-HCV的模型小鼠体内。通过活体双荧光成像技术实时监测特异性DCs在体内的分布、迁移、归巢，以及由DCs抗原提呈激活的CD8+T细胞在体内对HCV表达细胞的清除作用。本研究将为宿主DCs、T细胞与HCV体内相互作用的研究，以及为免疫效应细胞体内抗病毒作用效果的评价提供基础平台。

本研究按计划建立了萤火虫荧光素酶(（Flyfire Luciferase, Fluc）标记的持续表达HCV全基因组的小鼠模型(Balb/c小鼠模型及C57BL/6小鼠模型)；并利用表达HCV NS3的腺病毒对体外诱导分化的骨髓来源的小鼠DCs进行抗原负载和标记；分别采用尾静脉和腹腔注射等不同方式回输DCs，并监测其在小鼠体内的迁移、分布；应用荷载HCV NS3抗原的DCs疫苗尾静脉回输到Fluc标记的持续表达HCV全基因组的小鼠体内，利用活体荧光成像对DCs疫苗激活病毒特异性T细胞体内清除靶细胞的作用效果进行了实时监测和评价。