低氧诱导肝内胆管上皮细胞自噬在原发性胆汁性肝硬化中的作用机制

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种以肝内胆管上皮细胞（IBEC）损伤为主要特征的自身免疫性肝病。已经明确，PBC患者IBEC存在自噬现象，且处于低氧环境。但低氧与自噬的关系及二者对IBEC的作用尚不明确。我们在前期研究中发现IBEC可以表达粘附分子，分泌趋化因子，主动参与炎症损伤。而且，PBC患者肝组织门管区低氧诱导因子（HIF）-2α表达显著增高。因此推测低氧/HIF通路异常可以诱导IBEC自噬，并通过自噬对IBEC发生作用，包括诱导IBEC衰老、凋亡，或主动参与炎症损伤。为进一步确证，我们拟从组织、细胞和分子水平，应用免疫组化、基因过表达、基因沉默、电子显微镜、间接免疫荧光等多种技术，采用逐一验证的方式，从正反两方面阐明PBC发生发展过程中低氧/HIF通路异常诱导IBEC自噬对IBEC的损伤机制，为寻找有效阻断PBC发生发展的重要靶点提供有力借鉴。

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是以肝内胆管上皮细胞损伤为主要特征的慢性胆汁淤积性自身免疫性肝病，病因和发病机制未明。经本课题研究，取得以下结果： 一、免疫组化研究证实PBC患者肝内胆管上皮细胞低氧诱导因子HIF-1α和自噬相关分子Atg5和LC3Ⅱ表达增高，且PBC患者HIF-1α阳性表达率与Atg5和LC3Ⅱ阳性表达率分别呈明显正相关，提示PBC炎症发展过程中肝内胆管上皮细胞存在低氧和自噬的现象，且二者有一定相关性。二、通过体外分离和低氧培养人肝内胆管上皮细胞，发现HIF-1α和HIF-2α基因和蛋白表达量均明显增高，Atg5，LC3Ⅱ和Beclin1表达增高，细胞凋亡增加，分泌人神经趋化蛋白（CX3CL1）和人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）增加，而IL-8明显低于对照组。三、进一步通过低氧培养肝内胆管上皮细胞，转染HIF-1αRNA干扰慢病毒载体等方法，发现干扰HIF-1α后，细胞增殖减少且Atg5，LC3Ⅱ和Beclin1表达降低。自噬封闭后细胞凋亡增加，MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子表达明显减少，而ICAM-1表达无明显变化。EMSA结果表明HIF-1α主要通过与Atg5特异结合，诱导肝内胆管上皮细胞自噬。这些结果正在整理成英文文章，拟投SCI杂志。通过上述研究，基本阐明了低氧诱导肝内胆管上皮细胞自噬的分子机制之一，为有效控制PBC炎症进展提供了潜在靶点。此外，通过荟萃分析发现吸烟和泌尿道感染是PBC发病的危险因素，而二者亦是造成组织缺氧的诱因。本研究和国内外研究发现自噬可以诱导MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子表达，活化免疫反应，且与肿瘤发生有一定关联，我们的结果亦证实PBC确实是肝癌发生的一个独立危险因素。因此，通过临床、循证和基础研究，我们大体可以梳理出一个线索：吸烟和感染造成组织缺氧，诱导HIF-1α表达增高，与Atg5特异结合，诱导肝内胆管上皮细胞自噬，从而导致肝癌发病率增高。在本项目资助下发表SCI论文7篇，单篇最高影响因子12.003分。资助的论文获上海检验医学学术会议优秀论文一等奖，上海检验医学中青年英语学术论文演讲比赛二等奖。本课题培养硕士生1名，获校一等奖学金，并继续攻读博士学位。