Nrf2/ARE信号通路对RHDV感染中肝脏氧化应激的作用

Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) infection can induce fulminant liver failure (FHF) in rabbits, while the mechanism still unclear. Our previous study has analyzed the changes of liver proteins by proteomics analysis, and showed a significant differences about oxidative stress (OS) related proteins between RHDV infection and pre-infection, indicating that the OS might play an important role in liver damage in RHDV infection. Based on the results of proteomics analysis in the research, we first detect reactive oxygen species and oxidative damage markers by DCFH-DA and ELISA assay. Afterwards, we are aimed to analyze the effects of OS on Nrf2/ARE signaling pathway by western blotting, LSCM and ELISA. In addition, we are trying to research the effects of molecules expression in Nrf2/ARE signaling pathway on OS by Nrf2 agonist, and analyze the key elements in the pathway. Collectively, the study can clarify the effect of Nrf2/ARE signaling pathway on hepatic OS in rabbit hemorrhagic disease virus infection, and provide new direction and theoretical basis for pathogensis of RHDV.

兔出血症病毒（RHDV）感染可导致家兔产生暴发性肝衰竭，但目前该机制尚不清楚。我们前期通过蛋白质组学分析RHDV感染后肝脏组织中的蛋白变化，发现氧化应激（OS）相关蛋白在RHDV感染前后存在明显差异，提示OS 在RHDV感染导致的肝损伤中发挥重要作用。本项目基于蛋白质组学的研究，拟通过DCFH-DA和ELISA检测RHDV FHF肝脏中活性氧和氧化损伤标志物的水平；以western blotting、激光共聚焦、ELISA等分析OS对抗氧化信号通路Nrf2/ARE活性的影响；在此基础上，以Nrf2激动剂激活Nrf2/ARE信号通路，以real-time PCR和western blotting等研究通路下游抗氧化分子的表达及对OS的影响，并分析关键分子。本项目的实施将阐明RHDV感染中Nrf2/ARE信号通路对肝脏OS的作用，为RHDV致病机理的研究提供新的方向和理论依据。

兔出血症病毒(RHDV)属于杯状病毒科兔病毒属，可引起兔发生暴发性肝衰竭，但目前该机制尚不清楚。前期我们使用iTRAQ技术检测发现，RHDV能降低肝脏中Nrf2调控的抗氧化酶的活性，而机体抗氧化酶活性对于维持细胞完整性和细胞保护十分重要。本研究进一步发现，RHDV感染后不但抑制了ARE调控基因的表达，同时还上调了NF-κB转录因子p50亚基的表达。同时RHDV在肝脏的复制导致活性氧(ROS)的显著增加和Nrf2分子的显著降低。同时肝脏表现出氧化应激反应和严重的肝损伤，这表明RHDV感染导致的氧化应激与肝损伤密切相关。进一步研究发现，Keap1的核易位在Nrf2的核输出中起关键作用，导致Nrf2转录活性受到抑制。而p50蛋白可以与Keap1结合形成Keap1-p50/p65复合体，参与了Keap1从细胞质转位到细胞核。此外，抗氧化剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)上调肝细胞核中Nrf2的蛋白水平，并延缓了RHDV感染导致的兔死亡。我们的研究表明，RHDV通过Keap1-NF-κB的相互作用使Keap1核转位并诱导Nrf2出核，从而抑制Nrf2调控的抗氧化反应活性。本研究为阐明氧化应激反应在RHDV感染中的重要作用提供了新的视角。