肿节风体内入血成分及其抗炎作用机理研究

Sarcandra glabra is mainly used to treat inflammatory related diseases, but the metabolites in vivo and their anti-inflammatory mechanisms are still unknown. Preliminary study on the anti-inflammatory mechanism of the extract of Sarcandra glabra had been conducted. By further systematic chemical constituents study and LC-MSn analysis, six main fractions, including phenolic acids, coumarins, sesquiterpenoids, etc, were found to be coexisting as major constituents in both the extract and its four related preparations. This study is based on network pharmacology concept, aim to thoroughly investigate the metabolites in the rat serum of the Sarcandra glabra extract, by LC/HR-ESI-MSn analysis, and to seek potential anti-inflammatory constituents by combining the relationship of the serum' anti-inflammatory activities and the dynamic metabolites in serum.The anti- inflammatory mechanisms of representative constituents will also be studied, and the network action targets of Sarcandra glabra will be preliminarily constructed.The anti-inflammatory activity of the whole selected representative effective ingredients will be validated in the end. The study will be helpful to a better understanding the synergic effects of the multiple ingredients and their multiple action targets in TCM like Sarcandra glabra for the treatment of inflammatory related diseases, and it will also provide a relative practical research method to study the relationship of the bioactive chemical constituents and their action mechanisms for TCM.

中药肿节风主要用于治疗炎症性疾病，但有关其体内代谢成分及其抗炎作用机理研究缺乏。前期研究对其提取物抗炎作用机理进行了初步探索。进而对其提取物及单方制剂进行系统化学成分研究与分析发现其主要共同物质基础为酚酸、香豆素、倍半萜等六类有效部位。本研究基于网络药理学理念，采用血清药物化学和血清药理学相结合方法，液相-高分辨质谱联用手段系统分析肿节风主要化学部位/成分单独给药及提取物整体给药后动态入血成分。采用含药血清初筛各有效部位抗炎活性，结合不同时间点含药血清抗炎活性变化与其入血成分数与量动态变化相关性筛选抗炎活性部位，并深入探讨其入血成分体内抗炎作用机理，初步构建肿节风体内抗炎生物网络作用靶标，最后验证筛选抗炎指标性组合有效成分体内整体抗炎活性，多成分多层次多靶点阐明肿节风体内抗炎作用机理，并为中药及其复方药效物质基础研究提供一种相对可行的方法与思路。

基于疾病发生涉及多基因，治疗涉及多靶点的事实为组合药物开发提供了新机遇。.中药成分含量有大小，活性有强弱，吸收有差异，作用靶点有差别，故作用贡献度有主次之分，其正作用形式应为不同体内吸收成分作用于同一靶点的迭加及作用于不同靶点与环节的整体协同作用。在清楚疾病主要治疗靶点及中药关键作用组分前提下，可以进一步优化处方，改进工艺，以增效减毒，实现处方精简以及一方多用，并仍不失其整体有效性。.研究者发现很多疾病发生发展均与炎症相关。中药治疗优势在于多成分、多靶点、多途径的整体协同。阐明药效组分协同作用机制，最终将中药有效成分群与体内作用靶点群相关是深入进行物质基础与作用机理研究关键，但两方面工作均极其复杂。采用血清药物化学研究血中移行成分，系统整理口服中药体内作用物质使研究更有针对性，而从找到疾病相关靶点入手，逐一阐明中药复方整体作用靶点及作用关键组分，最后整体整合体内验证的研究思路切实可行。.基于上述研究背景，我们从定性、定量层次确定肿节风体外主要成分，并对其体内吸收成分进行全面研究。采用脂多糖刺激小鼠巨噬细胞免疫炎症模型，对典型炎症反应涉及指标(NO, iNOS, COX-2, TNF-α、IL-1β、IL-6 )测定进行活性筛选，并研究代表性成分/关键组分抗炎作用机理，探索工艺制备主要组分单体，对关键组分进行体内抗炎活性验证。结果：分析方面，建立液质联用分析方法同时测定肿节风17个成分含量，通过对照品确认了大鼠灌胃给药后36个原形入血吸收成分，并研究了7个主要成分体内代谢规律，归属了23个非原形成分母体来源；抗炎活性研究方面，筛选到抗炎活性成分19个，并研究I相代谢成分p-coumaric acid、原形吸收成分迷迭香酸苷，及关键组分（绿原酸+异嗪皮啶+迷迭香酸）对NF-kB/MAPK相关信号通路抗炎作用机理；我们还解决了肿节风中主要组分异嗪皮啶、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸等原料来源问题；采用LPS诱导小鼠急性肺损伤等炎症模型对主要单体及组分进行了体内抗炎活性验证。本研究既从多成分、多靶点层次研究了肿节风抗炎成分，又找到了基于NF-kB/MAPK通路关键作用组分。.我们采用基于整体观的、体内的、逐个靶点的中药药效组分简化研究思路，相对可行，应用到复方中药研究将更有意义。