祖师麻抗高尿酸血症有效成分及其作用机理研究

祖师麻是瑞香属植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche 的根皮和茎皮,是抗炎镇痛、活血化瘀中药，临床治疗痛风、风湿性关节炎和跌打损伤。文献报道含有香豆素、黄酮、二萜原酸酯类等成分。Edg1, Bdg1是从祖师麻中分离得到的新双香豆素、新双黄酮。实验表明祖师麻总香豆素含量1%以上，总黄酮0.6%左右。新化合物Edg1、Bdg1分别是其中主要成分。Edg1, Bdg1均能显著降低氧嗪酸钾致高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平；均能明显体外抑制黄嘌呤氧化酶活性，提示这两个新成分可能是治疗痛风、降尿酸的有效成分。本课题拟研究祖师麻抗高尿酸血症的有效成分及其作用机理，主要研究新化合物Bdg1、Edg1体内外抑制黄嘌呤氧化酶的活性、降低血清尿酸水平的活性和对尿酸排泄的影响，从而找到高效无毒副作用的新型药物。并进一步通过计算机模拟和晶体制备等方法研究药物与黄嘌呤氧化酶的分子对接，阐明作用机制。

项目基本按照研究计划实施，基本没有对计划进行调整。.　　　化学工作方面，应用现代提取分离技术完成了对植物黄瑞香 (Daphne giraldii Nitsche) 两个批次药材中化学成分的研究的工作。共从黄瑞香药材中分离鉴定了近50个单体化合物，其中24个为植物中首次发现，11个为属内首次发现，发现新化合物7个。化合物的结构通过理化性质和波谱学方法鉴定。.　　　生物活性研究包括以下几个方面：.　　　第一方面，通过体外黄嘌呤氧化酶活性试验筛选出7个活性化合物和两个活性组分。它们为：Edg1（祖师麻素）、Bdg1 （祖师麻双黄酮）、瑞香苷、瑞香素、木犀草素、5,7,3´-三羟 基-4´-甲 氧 基 黄 酮 、daphnodorin A及两个组分Edg和Bdg 具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性。.　 通过酶动力学特征实验，发现5,7,3´-三羟基-4´-甲氧基黄酮为非竞争性抑制，其余化合物为竞争性抑制。Edg1对黄嘌呤氧化酶抑制作用的量效关系试验表明Edg1和Allopurinol在各浓度下对黄嘌呤氧化酶的抑制作用无显著性差异。.　　第二，对部分化合物体内降高尿酸血症小鼠、大鼠血清尿酸的活性筛选，采用别嘌呤醇、非布索坦和苯溴马隆三种阳性药物进行对照，在动物模型上分别采用了急性高尿酸血症模型和持续型高尿酸血症模型。结果表明Edg1具有明显降低血清尿酸的作用。瑞香苷和Bdg1可能存在这方面的趋势。试验表明Edg1没有促进模型大鼠的尿酸排泄作用。Edg1具有降低高尿酸血症鹌鹑血清尿酸的作用。.　　　第三方面，抗炎活性试验。试验表明Edg1、Bdg1对动物炎症模型具有抑制作用。通过观察对尿酸钠所致大鼠特异性痛风性关节炎模型的影响，评价Edg1对尿酸钠所致大鼠关节炎的疗效。.　　　第四，机理研究方面，研究了Edg1对高尿酸血症小鼠血清和肝脏黄嘌呤氧化酶活性的影响。.　　　第五，通过计算机模拟，对活性化合物与黄嘌呤氧化酶进行了Docking试验，从另一个角度辅助性地证实Edg1、Bdg1等化合物对黄嘌呤氧化酶具有抑制作用。.　　　课题成果：本课题组至今已经发表的论文一共有九篇，其中有四篇SCI论文，其余为核心期刊论文。本课题实施期内共发表四篇论文，其中一篇SCI论文；二篇核心期刊论文。另有一篇核心期刊论文也已经接收发表。.提交发明专利一项，处于公开阶段。