补肾法对骨形成和骨吸收雌激素相关受体alpha作用机制探讨

骨质疏松等骨科疾病严重威胁着人类的安全，给人民带来极大的痛苦和经济负担。雌激素受体被认为在骨质疏松中起着重要的作用，但从基因敲除小鼠发现，除了雌激素受体还有其他的信号途径影响着骨形成和骨吸收。雌激素相关受体由于和雌激素受体具有高度的相似性，共同调控一些下游基因表达，被认为参与了雌激素受体的信号传导途径，而且在成骨细胞和破骨细胞中都具有高表达。本研究拟采用抑制剂，激活剂，siRNA，基因超表达等技术，探讨ERRalpha在骨形成和骨吸收中的作用和补肾中药的关系。并借助成骨细胞和破骨细胞共培养偶联技术与骨质疏松动物模型，研究ERRalpha在偶联环境和体内，对骨形成和吸收能力的影响。探明补肾法和ERRalpha在骨形成和骨吸收中的分子作用机理，为骨质疏松等骨科疾病开创新的治疗思路和理论依据。

1．.成骨细胞和破骨细胞的共育的体系为研究对象，不单研究MG63和RAW264.7的作用，并培养了鼠的成骨细胞和RAW264.7的作用，已经建立的几种模型都有一定的代表性，但是整体而言，难以有一个衡量的标准，本研究用细胞系分化培养，建立了较稳定的细胞共培养模型。.2．.活血中药为主的药物，在共育体系中对细胞中ALP，BMP等基因有促进作用，并和剂量成正向的关系，低剂量的活血中药，对细胞中CLO，RUX2等基因有促进的作用。黄芪对ALP有较优明显的促进作用，对细胞中CLO，RUX2等基因，没有检测出有剂量的依赖性，但高剂量黄芪，可以增加ALP的生成。实验中应用的XCT，是明显的增加了BMP和CLO的生成。.3．.活血中药的不同剂量，均可以增加OPG的生成，说明活血中药对骨的生成有重要的促进作用。高剂量的活血化瘀中药，同时增加了RNAK和RNAKL的量，说明中药在促进成骨的同时，对破骨也有一定的作用。.4．.利用基因报告系统证明，山奈酚可以在人成骨细胞株MG-63中激活雌激素受体的活性。在本研究中，细胞活性实验显示山奈酚可以显著的提高细胞活力，并促进成骨细胞前期分化标志ALP的活性和晚期分化标志骨矿化能力。.5．.报告系统中应用XCT-790可以显著的、特异性的分别降低ERRa和ERRβ的活性，但染料木素对ERRs的活性并无显著的影响， XCT-790来抑制ERRα的活性，从而抑制整个线粒体氧化磷酸化中比较关键的基因。.6．.成功构建并包装了表达hERRa基因的重组慢病毒载体，并发现过表达hERRa促进了a549细胞增殖，这与hEERa抑制剂能抑制细胞增殖的发现是一致的。.7．.PPARγmRNA在骨成骨中其扮演着重要性的角色， PPARγmRNA的过度表达最终导致股骨头内骨细胞变性，脂肪细胞变性积聚，最终导致骨坏死的发生；另一方面PPARγmRNA高度表达会使多能干细胞成脂分化增强，成骨分化被抑制，最终导致骨质疏松。.8．.对破骨细胞的前体细胞应用骨微粒和不同剂量的中药进行研究，结果提示，不同剂量含药血清均能增高TGF-β的表达，降低TNF-α的表达，说明活血中药在抗炎中有一定的疗效，和临床的发现相同。.9．.去势作用后，BMU处于抑制状态，成骨细胞存活减少，而破骨细胞活动增加。成骨与破骨失去正常的耦合作用。补肾中药增加了骨细胞的活性.