Nogo-B与BEX1结合参与细胞凋亡对小细胞肺癌发病机制的作用研究

前期工作中首次筛选出Nogo-B结合的下游分子BEX1，证实Nogo-B能引起细胞凋亡且BEX1过表达可逆转这种现象，并提示Nogo-B可能通过对BEX1表达和转位的调节参与细胞凋亡。结合目前关于Nogo-B是否引起细胞凋亡的争论和部分Nogo-B与肿瘤相关性的文献报导，拟开展Nogo-B与BEX1结合参与细胞凋亡对小细胞性肺癌SCLC发病机制的影响研究。本研究的目的是通过分子生物学、细胞形态学等方法进一步明确Nogo-B和BEX1体内结合及其部位；探讨SCLC病理变化是否由于Nogo-B对BEX1表达和转位的调节参与细胞凋亡的失衡造成，并寻找可能的下游信号转导通路；通过动物实验和组织形态学检测进一步验证Nogo-B调节BEX1参与细胞凋亡对于SCLC病理发生的影响作用。本研究对揭示Nogo-B诱导细胞凋亡的调控机制，探索其在SCLC发病机制中的影响，寻找新的诊断标记和治疗标靶有一定意义。

本研究预期研究目的是通过分子生物学、细胞生物学等技术方法明确Nogo-B和BEX1的相互结合的关系及结合的部位；探讨SCLC病理变化是否由于Nogo-B对BEX1表达和转位的调节参与细胞凋亡的失衡造成，并寻找可能的下游信号转导通路；通过组织病理学检测进一步验证Nogo-B调节BEX1参与细胞凋亡对于SCLC病理发生的影响作用。课题组通过开展研究，取得了以下研究结果：（1）分别从酵母真核生物水平和哺乳动物细胞水平证实了Nogo-A、Nogo-B与BEX1、p75NTR均存在体内和体外结合，大鼠肺和脾脏中均能发现二者存在内源性结合，细胞内结合的主要部位为细胞质。（2）细胞凋亡检测结果提示：不同于相同家族成员Nogo-A，过量表达Nogo-B可以明显诱导多种细胞包括人小细胞肺癌细胞NCI-H446发生细胞凋亡， Hoechst染色可见明显核固缩、凋亡小体产生，凋亡晚期细胞核崩解等三期分型,而BEX1转染可以明显逆转这种凋亡现象，（3）Western blot和RT-PCR检测结果提示：过量表达Nogo-A可降低BEX1的基因表达与蛋白表达水平，而Nogo-B并不影响对BEX1表达的调控。但GFP- BEX1随着过量表达Nogo-B的时间推移，会发生从胞浆向胞核内的转位现象，且转位与细胞凋亡比例上调呈正相关。（4）HEK293、NCI-H446细胞凋亡的信号转导实验结果均提示：Nogo-B诱导细胞凋亡并非通过p38或PI3-K途径，而是特异性的经JNK途径进行。除此之外，课题组还利用表达谱基因芯片检测技术开展了Nogo-B过量表达对NCI-H446细胞差异表达基因和初步功能的探索分析，鉴于初步结果的保密性，研究结果将在书面文件中递呈。以上研究结果均为国内外首次发现，本研究对揭示Nogo-B诱导细胞凋亡的调控机制，探索其在SCLC发病机制中的影响，寻找新的诊断标记和治疗标靶有一定意义。目前，项目已取得的研究成果包括：核心期刊发表论文4篇、SCI杂志投稿2篇（总计IF6.5）、获批国家发明专利1项。专利成果为本基金与上海市科委基金项目No.08411965600共同资助，自然基金在专利研发过程中提供了实验室公共平台建设与基础研究的技术支持。