基于CB1受体电针调控肠神经胶质细胞保护尿毒症大鼠肠屏障作用及机制研究

The incidence rate of intestinal barrier injury is high in uremia, with poor outcome. Our previous studies detected the expression of cannabinoid 1 (CB1) receptor in enteric glial cells, and increased expression of CB1 receptor and intestinal epithelial tight junction protein expression after electroacupuncture for the first time. CB1 receptor plays a very important role in the acupuncture treatment of several diseases, and the enteric glial cells are the central regulators to maintain the intestinal barrier function. Based on these, we hypothesized that electroacupuncture protects the intestinal barrier by intestinal glial cell CB1 receptor via inhibition of JNK pathway. The related changes in intestinal barrier function and enteric glial cells are observed after electroacupuncture at Zusanli to rats by using inhibitor/stimulator of CB1 receptor; after intervention, enteric glial cells cultured with intestinal epithelial cells, the transepithelial electrical resistance and the changes of cell tight junction proteins and permeability of Dextran will be assessed in epithelial cell layer. The mechanism of electroacupuncture on protecting the intestinal barrier of uremia will be revealed.

尿毒症肠屏障损伤发生率高，肠毒素及细菌入血，加重病情发展。我们首次发现大麻素CB1受体在肠神经胶质细胞中表达且电针后增高，肠上皮紧密连接蛋白表达也上调，肠屏障功能好转。CB1受体在电针治疗中发挥着重要作用，肠神经胶质细胞为肠屏障功能的枢纽调节者。因此我们推测电针通过肠神经胶质细胞CB1受体发挥肠屏障保护作用，该作用可能是通过抑制JNK通路实现的。建立尿毒症大鼠模型，电针刺激足三里，运用CB1受体抑制剂/激动剂干预，观察肠屏障及肠神经胶质细胞的变化；体外培养肠神经胶质细胞，进行干预，然后和肠上皮细胞共培养，观察肠上皮细胞间电阻、紧密连接蛋白和Dextran穿细胞层量的变化。揭示电针对尿毒症肠屏障的保护作用及分子机制。

终末期肾病是各种慢性肾脏病最终的结局，其死亡率高达25%，预期寿命比正常人群短20-25年。ESRD患者普遍存在微炎症状态，约占ESRD患者30%-50%。ESRD存在肠道上皮紧密连接受损，肠道毒素及细菌入血，加重了ESRD。因而探索保护ESRD患者肠屏障，纠正损害的肠屏障的治疗方法具有重要意义。. 许多研究表明针刺“足三里”穴，促进肠道屏障功能恢复，但是机制尚不清楚。研究发现大麻素受体CB1R敲除的小鼠呈现肠道通透性增高，四氢大麻酚和大麻二酚能够增加紧密连接蛋白ZO-1的表达；足三里刺激缓解出血诱导的肠道炎症，这种作用是通过激活肠道胶质细胞发挥作用的。肠道胶质细胞也可以通过上调肠道上皮claudin，occludin和ZO-1等蛋白的表达, 上调肠上皮层的跨上皮电阻值, 降低其胞间通透性, 有效维持肠屏障功能完整性。我们首次发现大麻素受体CB1R在肠神经胶质细胞中表达且电针后在肠道组织中表达增高。因而我们推测电针通过肠神经胶质细胞CB1R保护肠屏障。. 本研究运用尿毒症模型，电针刺激足三里，采用分子生物学技术发现：电针足三里刺激纠正了腺嘌呤所致的ESRD引发的肠道紧密连接蛋白ccludin、Claudin1、ZO-1的降低，证实电针足三里能够保护肠粘膜；通过大麻素受体CB1R的拮抗剂AM521预处理，逆转了电针足三里保护腺嘌呤所致的ESRD导致的肠屏障损伤作用，初步证实大麻素受体参与电针足三里保护肠屏障的作用；电针增加了GFAP和S100β的表达；CB1R的拮抗剂AM251预处理抑制电针引发的GFAP和S100β的增加, 说明肠神经胶质细胞参与电针足三里保护肠屏障的作用；电针足三里后肠组织p-JNK显著增加，而在应用CB1R的拮抗剂AM251预处理后，p-JNK显著降低，证实了JNK参与了在电针足三里保护肠屏障的作用。. 本研究明确了电针通过肠神经胶质细胞的CB1R保护肠屏障作用，为临床尿毒症患者肠屏障损伤辅助治疗和药物开发提供了理论依据和新的思路。肠屏障损伤的纠正，延缓尿毒症的进展，造福于尿毒症患者。