肝癌干细胞microRNA特异性表达谱及其靶基因筛查验证研究

肝切除术后肝癌复发转移缺少有效早期诊断及治疗方法是目前影响肝癌疗效的主要原因，建立肝癌诊断治疗新方法是提高肝癌患者长期存活率的关键。我们前期在部分肝癌细胞株和原代肝癌标本中分离出高度怀疑为肝癌干细胞的细胞群，本研究拟利用肝癌干细胞表面标志物，对肝癌细胞株及肝癌组织中的肝癌干细胞进行分离，利用microRNA 芯片技术对肝癌干细胞miRNAs进行高通量的谱系分析得到候选miRNAs，对其进行体外、体内功能验证，进一步筛查特异性肝癌干细胞miRNAs，结合生物信息学技术对肝癌干细胞miRNAs的靶基因进行预测和验证，同时在正常肝细胞、肝硬化组织、肝癌患者血清、肝癌组织及常见肿瘤中的表达进行验证，筛选出和肝癌干细胞高度相关的候选基因和治疗新靶点，为肝癌的复发和转移建立基因水平上的早期诊断及预后判断指标。

肝切除术后肝癌复发转移缺少有效早期诊断及治疗方法是目前影响肝癌疗效的主要原因，建立肝癌诊断治疗新方法是提高肝癌患者长期存活率的关键。目前认为肿瘤可能起源于肿瘤干细胞，虽然尚无公认的肝癌干细胞表面标记，但是肿瘤干细胞在肿瘤的发生发展、转移复发及预后中起着重要的作用已达成共识。本项目先后在多种肝癌细胞株（Bel-7402、SMMC-7721、MHCC97h 、Huh7 及 PLC/PRF/5）中利用侧群细胞分离、CD133标志物及无血清培养基分离富集肝癌干细胞等不同方法对肝癌干细胞进行了分选验证研究，通过克隆形成实验、Transwell实验及裸鼠成瘤实验证实肝癌干细胞具有更强的侵袭能力和体内成瘤能力，通过这些研究建立了多种分选肝癌干细胞的方法，为今后深入研究肝癌干细胞提供技术平台；进一步利用microRNA芯片技术对体外培养肝癌细胞株和其对应的肝癌干细胞分别进行miRNA表达谱进行检测研究，经过分析初步筛选得出60多个差异表达的microRNA，有望成为针对肝癌干细胞的治疗新靶点，并对miR-184在肝癌发生发展中的作用进行了深入研究，结果发现miR-184可促进肝癌细胞在体外的增值和肿瘤的形成，miR-184促进肝癌细胞增值和肿瘤发生是通过抑制内源性SOX7的表达实现的；通过分析109例肝癌肝移植病例的临床资料，发现干细胞表面标志物CD133与肝癌肝移植预后有关，是影响肝癌肝移植患者术后生存率的独立危险因素，以上研究有助于为肝癌术后的复发和转移建立分子水平上的早期诊断及预后判断指标提理论依据。