剪切的乙酰胆碱酯酶在老年痴呆病老年斑形成中的作用

老年痴呆病人的脑中，老年斑和神经元丢失与乙酰胆碱酯酶（AChE）的关系十分密切。老年斑中的AChE与突触部位的AChE不同，能促进Abeta的聚集，但结构上不知其差异的根本所在。我们研究了凋亡相关AChE的表达调控、抑制剂保护细胞并且制备了特异抗体。最新发现，AChE在凋亡细胞中，类似于caspase家族，被剪切活化、入细胞核，但不知在何处剪切，怎样入核。本研究将用自己的特异识别剪切的AChE的抗体分离纯化该片段，探索其怎样入核极其功能。以AChE剔除小鼠、老年痴呆模型动物、AChE-S型转基因动物小鼠以及SK-N-SH、PC12细胞株为材料，用基因克隆、PCR、shRNA、抗体亲和、免疫共沉淀等方法，研究ACHE片段的作用。我们还将对两种可能剪切ACHE的酶进行研究。在明确了剪切的AChE序列后，研究它与Abeta的结合的条件、速度和强度，以及在老年斑形成过程中的作用。

AD是一种多病因的进行性、致命性神经退行性疾病，关于其发病机理尚存在争论。在众多假说中，我们实验室尤其关注AChE在AD中的作用。由凋亡引起的神经元丢失被认为是AD重要的病理特征，并且我们以往的研究已经证明AChE在多种细胞凋亡中通过入核起到了重要作用。因此，我们通过建立急性AD模型，证实了发病过程中AChE的参与，并且观察到AChE入核与凋亡信号的共定位。这项结果从实验动物的层面上证明了AChE在AD发病中的参与凋亡。另外，鉴于AD发病的复杂性，我们还考虑了AChE通过其它通路参与AD发生的可能。在对AChE基因敲除的杂合子小鼠脑提取液的研究中，我们发现相对于野生型小鼠，杂合子的伽马分泌酶剪切APP底物的能力下降。通过体外实验，我们证明了在293细胞中瞬转AChE能够抑制伽马分泌酶剪切APP底物的能力，建立起了AChE与伽马分泌酶的联系。