Claudin-3在视网膜神经血管单元中的作用研究

异常的新生血管生成是视网膜血管性疾病共同的最终结局和世界范围内主要的致盲原因。随着神经血管单元和神经驱动血管新生理论的提出，星形胶质细胞在血管新生中的调控机制成为国内外研究的热点。最近我们首次发现紧密连接蛋白Claudin超家族中的Claudin-3在视网膜星形胶质细胞上表达，且缺氧可增加其表达。视网膜星形胶质细胞上的Claudin-3是否参与调控神经血管单元？是否引导视网膜血管生成？是否参与内皮细胞紧密连接的形成和维持呢？因此，本项目拟采用慢病毒介导的转基因高表达和RNA干扰技术、荧光实时定量PCR、细胞共培养技术、免疫荧光共聚焦和膜片钳等技术，首次探讨Claudin-3对视网膜星形胶质细胞功能的影响以及调控正常发育和氧诱导血管增殖性视网膜病变小鼠的视网膜神经血管单元的作用及其机制，为确立Claudin-3作为视网膜血管性疾病防治的新靶点提供科学依据。

自1998年发现第一个Claudin亚型以来，至今在小鼠和人类中已发现至少27个Claudin家族成员，分别命名为Claudin-1至-27。Claudins (CLDNs)编码分子量大约20-28 KD 的紧密连接（tight junction， TJ）跨膜蛋白，主要存在于上皮细胞、内皮细胞和多种肿瘤细胞中，是构成细胞-细胞间TJ的重要功能蛋白，在细胞极性和屏障功能的维持中起重要作用；另外，研究还发现Claudins蛋白还参与细胞增殖分化、基因转录、肿瘤抑制等信号转导过程，在细胞的增殖和凋亡中发挥重要作用。Claudin-3是近年来新发现的Claudins蛋白超家族成员。目前关于Claudin-3的研究主要集中在上皮细胞和恶性肿瘤细胞中，对其在视网膜中的表达、定位分布及其功能均处于未知状态，值得进一步深入研究。我们的前期研究发现正常发育的小鼠视网膜中可检测到Claduin-3 mRNA的动态差异表达，本研究首先研究了Claduin-3 mRNA和蛋白在氧诱导的血管增殖性视网膜病变(oxygen-induced retinopathy，OIR)小鼠模型中的动态表达变化，并对其在视网膜的表达进行定位，然后在细胞水平进一步探讨其功能，从而为确立Claudin-3作为视网膜神经细胞损伤性疾病和病理性新生血管疾病治疗的新靶点提供了更充分的科学依据。