解毒祛瘀滋阴法对红斑狼疮淋巴细胞雌激素受体亚型的选择性调控作用

系统性红斑狼疮是自身免疫异常而致多器官受累的难治性疾病，以T细胞过度辅助和B细胞异常活化、大量自身抗体形成为主要特点。雌激素在其发生发展中起着重要作用。西医主要应用糖皮质激素和免疫抑制剂治疗，虽有一定疗效，但毒副作用多、复发率高是临床面临的主要困境。.前期研究发现解毒祛瘀滋阴法对SLE具有较好的疗效。现拟利用RNA干扰技术和雌激素受体亚型抑制剂选择性抑制ERα或ERβ，以流式细胞术检测淋巴细胞凋亡、增殖和T淋巴细胞亚型，重组DNA技术检测ERE-luc报告基因的转录活性，蛋白免疫印迹法检测ERα、ERβ及其信号转导激酶的磷酸化，荧光共振能量转移检测ER与信号转导激酶的相互作用。旨在研究解毒祛瘀滋阴法是否通过选择性地调控ERα、ERβ和信号转导激酶而影响淋巴细胞功能，阐明其对雌激素-免疫环路的调节机制，为中医药治疗SLE奠定科学依据。

一、项目背景：系统性红斑狼疮（SLE）是自身免疫异常而致多器官受累的疾病，存在T细胞过度辅助和B细胞异常活化，产生大量的自身抗体。西医主要应用糖皮质激素和免疫抑制剂治疗，虽有一定疗效，但毒副作用多、复发率高是临床面临的主要困境。性激素特别是雌激素在SLE发生发展中起着非常重要的作用。SLE的ERαmRNA表达量升高，而ERβmRNA的表达与SLEDAI（SLE活动指数）呈较强的负相关。本课题组经长期临床观察和实验研究发现，解毒祛瘀滋阴法治疗SLE具有较好的临床疗效，能显著减少并发症、有效降低sIL-2R水平、促进PBLC凋亡，并对性激素-免疫调节环路具有良性调节作用。.二、主要研究内容：1. 研究解毒祛瘀滋阴法选择性调控ERα、ERβ而影响淋巴细胞；2. 研究解毒祛瘀滋阴法对ERα、ERβ及信号转导激酶磷酸化的调控作用。.三、重要结果、关键数据：1. 建立了含药血清质控方法，对每一批次的解毒祛瘀滋阴方含药血清进行阿魏酸和异阿魏酸的含量测定，以保证含药血清质量的可靠性和稳定性。2. 解毒祛瘀滋阴方含药血清可有效的抑制淋巴细胞增殖、促进其凋亡，并促进Caspase-3 mRNA以及蛋白的表达。3. ERα、ERβ 之间具有相互拮抗作用，解毒祛瘀滋阴方含药血清能明显抑制ERα表达、抑制其磷酸化激活，抑制ERα对ERβ 的拮抗作用，同时能促进ERβ的表达、促进ERβ的磷酸化、促进ERβ对ERα的拮抗作用。4．解毒祛瘀滋阴方可以抑制雌激素受体相关的PI3K/AKT信号通路分子（ERK 、PI3K、AKT）mRNA及蛋白表达，并抑制ERK磷酸化，从而影响雌激素受体的表达，改善SLE患者疾病活动度。5．解毒祛瘀滋阴方含药血清抑制ERα转录活性，促进ERβ的转录活性。.四、研究成果：1.解毒祛瘀滋阴可以通过选择性调节ERα和ERβ活性而影响淋巴细胞功能；2.解毒祛瘀滋阴法对ERα和ERβ的选择性调节作用与其影响ER亚型及相关信号转导激酶（ERK 、PI3K、AKT）表达及其磷酸化有关；3. 发表的11篇学术论文。.五、科学意义：从协调阴阳对立平衡的角度证实了解毒祛瘀滋阴方对ERα和ERβ选择性调控是其治疗SLE疗效机制之一，丰富了中医阳阴学说科学内涵；从雌激素-免疫调节环路着手，多层次、多角度探讨了解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的作用靶点及途径。