从肠道微生物调控NLRP3炎性小体探讨痛风湿热证的发病机制及四妙散的干预作用

The damp-heat syndrome is the most common in gout, and Simiaosan is a clinically effective prescription treating the damp-heat gout-derived arthritis. The gut microbiome plays an important role in the process of purine metabolism, the excretion of uric acid, and inflammation response. Our previous study had proved the dysbiosis of gut microbiome in damp-heat gout patients and established the inclusion criteria of the damp-heat gout patients. This study is focused on effects of gut microbiome deriving from the damp-heat gout patients with acute attack, and mechanisms of the regulation gut microbiome upon NLRP3 inflammasome. This study is aimed to reveal the correlation between gut microbiome and the damp-heat gout, illustrate the mechanism how Simiaosan treating the damp-gout through gut microbiome, and provide scientific evidence for revealing biological basis of TCM syndrome and treating mechanisms of Chinese herbal compound.

湿热证为痛风性关节炎的主要证型，四妙散是临床治疗痛风性关节炎湿热证的有效代表方剂。肠道微生物参与了宿主机体的嘌呤代谢、尿酸排泄及炎症发生。申请人前期研究证明痛风湿热证患者的肠道微生物显著紊乱，并拟定痛风湿热证肠道微生物的入选标准。本项目拟从TLR4和NLRP3受体介导下调控NLRP3炎性小体角度，探讨肠道微生物对痛风性关节炎湿热证的发生及病情发展的作用。本项目旨在明确痛风湿热证与肠道微生物的相关性及机制，从肠道微生物角度阐明四妙散治疗痛风湿热证的机制，为中医病证的生物学基础及中药复方的治疗机制提供科学依据。

痛风性关节炎（Gout arthritis，GA）是尿酸盐沉积导致的一种晶体性关节炎，其基本病机与湿热证相关。四妙散是清热利湿的代表方剂，临床用于治疗GA可获得较好效果。以往研究提示肠道菌群与GA密切相关，其可能通过调控NLRP3炎性小体达到影响GA的作用，该通路也可能是四妙散治疗GA的机制之一。因此本项目围绕上述假说，进行科学论证。（1）采用抗生素和粪菌移植方法干预C57BL/6小鼠的肠道菌群，在注射尿酸盐结晶。结果显示：抗生素干预肠道菌群后可加重小鼠痛风病情，移植湿热证痛风患者的肠道菌群对小鼠痛风病情的影响要明显弱于抗生素；（2）基于高脂饲料和尿酸盐构建的GA小鼠模型，采用四妙散治疗。结果显示：四妙散可通过调节TNF-，Caspase 8和AIFM1蛋白表达来抑制NLRP3炎性小体表达以及细胞凋亡，通过调节APOB，LPL，PPARα 蛋白表达来影响脂质代谢，减少潜在的病原体并恢复肠道菌群，从而达到治疗GA的目的；（3）基于LPS和MSU联合刺激的RAW246.7细胞构建NLRP3活化的细胞模型，分别采用四妙散水煎剂冻干粉和含药血清进行干预。结果显示：四妙散水煎剂和含药血清均可抑制MSU进入细胞，且显著抑制NLRP3及下游基因的表达，上述作用于药物浓度相关。在上述研究结果的基础上，可以得出以下结论：湿热证痛风患者的肠道菌群具有加重小鼠痛风病情的作用，但效果弱于抗生素；四妙散可通过调控肠道菌群和NLRP3炎性小体达到治疗痛风性关节炎的目的。