解毒祛瘀滋阴方对红斑狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化调控的影响

Systemic lupus erythematosus(SLE) is an autoimmune disease with multi-systemic organs injury, long period, and bad prognosis. DNA methylation regulation is one important regualtion of epigenetics, abnormal expression of DNA methylation regulation gene（Gadd45a and DNMT1）can induce low DNA methylation of global genome in CD4+ T cells,which will result in SLE onset or aggravation. Our previous studies confirm that Jieduquyuziyin decoction can obviously lighten SLE disease activity and improve patients' life quality. Based on MRL/lpr rats in this study, after detection of DNA methylation level of global genome of CD4+ T cells through HPLC, gene expression level of upstream methylation regulating gene（Gadd45a and DNMT1）and downstream methylation sensitive gene (CD70, PP2Acα and IL-10) were detected through Real-time PCR and Western-blot, we hope supply the hypothesis of DNA methylation regulaiton of Jieduquyuziyin decoction with theory support, broaden its clinic practice.

系统性红斑狼疮（SLE）是一种多系统损害、病程长、预后差的自身免疫性疾病。DNA甲基化调控是表观遗传学的重要调节方式，SLE患者DNA甲基化调节基因（Gadd45a、DNMT1）表达异常，导致CD4+T细胞基因组DNA"低甲基化"，诱导SLE发病或加重。前期研究证实解毒祛瘀滋阴方可缓解SLE病情，提高生存质量。本项目将在MRL/lpr狼疮鼠基础上（体内和体外），通过HPLC法检测该方对狼疮鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响，Real-time PCR法和Western-blot法检测其对上游甲基化调节基因（Gadd45a、DNMT1）表达水平和下游甲基化敏感基因（CD70、PP2Ac、IL-10）表达水平的影响，为"解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的DNA甲基化调控假说"提供理论依据，进一步完善其治疗SLE的作用机制，有助于其临床推广应用。

（一）研究背景 . 系统性红斑狼疮（SLE）是一种多系统损害、病程长、预后差的自身免疫性疾病。DNA甲基化调控是表观遗传学的重要调节方式，SLE患者DNA甲基化调节基因（Gadd45a、DNMT1）表达异常，导致CD4+T细胞基因组DNA“低甲基化”，诱导SLE发病或加重。前期研究证实解毒祛瘀滋阴方可缓解SLE病情，提高生存质量。.（二）研究内容. 包括动物实验（解毒祛瘀滋阴方）和细胞实验（青蒿素），以下五个部分。 . ①解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠的药物疗效观察。. ②解毒祛瘀滋阴方（青蒿素）对CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响。. ③解毒祛瘀滋阴方（青蒿素）对DNA甲基化调节基因（去甲基化基因Gadd45a、加甲基化基因DNMT1）表达水平的影响，以及DNA甲基化敏感基因（CD70、PP2Acα、IL-10）表达水平的影响。. ④系统性红斑狼疮患者糖皮质激素受体表达水平与其启动子区DNA甲基化水平关联性研究。. （三）研究结果. （1）解毒祛瘀滋阴方可以改善MRL/lpr小鼠毛发光泽，减轻面部皮损。通过降低dsDNA浓度下降、升高补体3浓度、减少尿蛋白排泄，缓解狼疮活动。. （2）解毒祛瘀滋阴方通过抑制Gadd45a基因表达，升高基因组甲基化水平，减少甲基化敏感基因IL-10、PP2Ac mRNA表达。. （3）SLE患者DNMT1表达水平升高，可能导致糖皮质激素受体（GRa）基因启动子区DNA甲基化水平升高，导致GR表达水平降低。. （4）青蒿素能够上调狼疮小鼠CD4+T细胞中基因组DNA的甲基化水平，抑制CD70，PP2Acα，IL-10表达，上调DNMT1表达，抑制Gadd45a表达，抑制DNA甲基化启动相关基因AID和MBD4 mRNA和蛋白的表达。. （四）科学意义. （1）国内首次明确提出将“低甲基化”作为治疗SLE的一个新作用靶点。.“低甲基化”是国外研究者开发治疗SLE药物的新热点，本项目首次明确提出将“低甲基化”作为治疗SLE的一个新作用靶点。. （2）首次提出解毒祛瘀滋阴方治疗SLE作用机理的DNA甲基化调控假说。. 本项目首次提出解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的DNA甲基化调控假说，从表观遗传学角度进一步完善其作用机制，为其临床推广应用提供依据。