长链非编码RNA-NRON在动脉粥样硬化中的作用机制研究

Long noncoding RNA catch the most eyes in health and disease, but little attention was paid to atherosclerosis (AS). The applicant of this grant found for the first time that in the human AS specimens, the expression of long noncoding RNA-NRON was significantly decreased. And in human smooth muscle cells, the stimulation of ox-LDL after the knockdown of NRON could significantly promote T cell nuclear factor (NFATc3) translocation into the nucleus and combine with PPARα. The applicant further hypothesized that NRON play an important role for inhibiting the formation and development of AS via adjusting the signaling axis-NFATc3/PPARα..This project is designed to prove this hypothesis and further explore its regulatory mechanisms in vitro and in vivo using cell models, mouse models, and tissue specimens. After NRON expression is restored by transfecting with NRON lentivirus or shRNA, cell and mouse models will be used to investigate the secretion of cytokine, extracellular matrix synthesis, smooth muscle cell proliferation, migration and the phenotypic transformation. IP、RNA pull down and ChIP assays will be employed to explore the molecular mechanism of the interaction between NRON and NFATc3。 .The success of this project will provide us with new therapeutic targets for atherosclerosis.

lncRNA在人类健康和疾病中的作用日益受到重视，但在动脉粥样硬化(AS)中的研究却鲜有报道。申请人首次发现在人的AS标本中，非编码RNA-NRON表达明显下降。而且在人平滑肌细胞中，敲低NRON后给予ox-LDL刺激，可明显促进T细胞核因子（NFATc3）转位入核与PPARα相互结合。因而申请人率先提出在AS过程中，NRON可通过调节NFATc3/PPARα信号通路,发挥潜在抑制AS形成与发展的作用的科学假设。本课题将在细胞-动物-组织标本三个层次求证这一假设并深入探索其调控机制。通过高表达和敲低NRON后，在小鼠AS模型和细胞模型中研究NRON表达改变对炎症因子分泌、细胞外基质合成、平滑肌细胞增殖迁移以及表型转化的作用；进一步采用IP、RNA pulldown、ChIP等方法探讨NRON与NFATc3之间相互作用的分子机制，为AS的靶向治疗提供新的理论基础和实验依据。

本课题历时3年，所有工作按计划完成。本项目通过动物模型构建、细胞实验等工作研究了非编码RNA Nron在动脉粥样硬化发病中的作用和机制。研究证实了Nron在动脉粥样硬化发生发展过程中的关键作用:（1）Nron在人血管平滑肌中表达，在动脉粥样硬化斑块中表达下调。（2）Nron在ApoE-/-小鼠主动脉中的表达随动脉粥样硬化病情进展降低且过表达Nron增加斑块的不稳定性。（3）Nron在小鼠平滑肌细胞中可以通过与活化T细胞核因子（NFATc）家族中的NFATc3，NFATc4结合进而影响平滑肌细胞的凋亡和增殖。（4）Nron通过增加粥样斑块内VEGFA的水平进而调控血管生成相基因的表达，促进粥样斑块内新生血管形成。我们的研究成果进一步阐明了动脉粥样硬化发病的分子机理，并为其早期诊断、治疗和预防进步提供了理论和实验依据。.本项目实施过程中共发表SCI文章3篇，其中包括影响因子5分以上文章一篇。本项目研究累计培养研究生5人，其中硕士在读3人，博士在读1人，毕业1人。我们在实验过程中运用了多种分子生物学实验技术和手段，为后续研究工作的开展搭建了先进的实验技术平台。