新型长链非编码RNA-CoroMarker在动脉粥样硬化中的作用及机制研究

Long non-coding RNA (lncRNA) regulates a variety of biological processes. In order to further understand the role of lncRNA in atherosclerosis，a microarray was performed to identify an lncRNA, named as CoroMarker. Our preliminary data showed that CoroMarker have promoted vascular smooth muscle cell proliferation. Further study found that CoroMarker not only regulated PTEN expression, but also combined with EZH2. Previous studies have showed that EZH2 can affect gene expression by regulation of chromosome histone methylation. Therefore, we hypothesize that CoroMarker may act as molecular scaffold recruiting PRC2 compound to specific sites in PTEN promoter area, promoting their methylation and inhibiting the PTEN expression, thereby promoting vascular smooth muscle cell proliferation and affecting the occurrence and development of atherosclerosis. In this proposal, apoE-/- mice ,CoroMarker transgenic mice and knock-out mice will be used to uncover the mechanism of CoroMarker; moreover, we will use lentivirus vector to check whether or not CoroMarker will serve as a new target for the treatment of atherosclerosis and to provide new ideas for the prevention and treatment of atherosclerosis.

长链非编码RNA(lncRNA)调控多种生物学过程，为了进一步了解lncRNA在动脉粥样硬化中的作用，我们通过芯片筛选到CoroMarker。预实验显示CoroMarker促进血管平滑肌细胞增殖。进一步研究发现CoroMarker不仅能调控PTEN的表达，还能与EZH2直接结合。既往研究显示，EZH2能通过影响染色体组蛋白甲基化调控基因表达。因此我们推测：CoroMarker能作为分子支架募集PRC2复合物(EZH2是其组分之一)至PTEN基因启动子，促使其组蛋白甲基化，从而促进血管平滑肌细胞增殖，影响动脉粥样硬化发生发展。本课题拟采用apoE-/-小鼠，CoroMarker特异敲除及过表达小鼠作为研究对象，探讨CoroMarker在动脉粥样硬化中的作用；并通过重组慢病毒观察其是否可作为治疗动脉粥样硬化的新靶标，为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。

探讨CoroMarker在AS中的作用以及具体机制，敲低/过表达 lncRNA及PTEN，通过CCK8检测各组细胞活性， WB检测VSMC细胞中PCNA、PDGF-A 、IGF-1的表达水平。 Ki67免疫荧光染色检测观察VSMC增殖情况。干扰LncRNA可抑制VSMC细胞的增殖。过表达lncRNA促进VSMC细胞的增殖，过表达PTEN抑制VSMC细胞增殖，同时过表达lncRNA 和PTEN，其对细胞增殖无影响。说明干扰PTEN可促进VSMC细胞增殖，而干扰lncRNA 可抑制VSMC细胞增殖，同时干扰lncRNA 和PTEN，其对细胞增殖无影响。CoroMarker通过调控PTEN的表达促进VSMC增殖，进而影响AS发生发展。通过基因表达谱鉴定动脉粥样硬化的分子亚型和关键基因，利用NMF算法，将数据集分组并进行WGCNA分析，确定关键模块。通过KEGG和GO富集分析，确定了模块的潜在功能和通路。使用cytoscape软件构建了一个蛋白质-蛋白质网络并可视化。采用 LASSO和SVM-RFE算法进一步筛选关键基因并进行了免疫细胞浸润分析。发现在naïve B细胞、CD8 T细胞、T调节性细胞(Tregs)、静息NK细胞、单核细胞、巨噬细胞的免疫细胞浸润水平在两个亚组之间存在显著差异。此外，三个hub基因与Tregs呈正相关，而与巨噬细胞M0呈负相关。三个关键基因在正常组织和病变组织之间以及在不同的亚组中有差异表达。ROC结果显示验证数据集具有良好的性能。结果为了解AS的细胞和分子特征以及诊断和靶向治疗的提供新的思路。 .