Ago2在多发性骨髓瘤血管新生中作用及其机制研究

多发性骨髓瘤（MM）迄今仍是不可治愈的疾病，故需进一步研究其发病中起关键作用的因子。Ago2是70个预测MM患者早期死亡的基因之一，但在MM中的作用机制尚不清楚。我们前期研究发现MM细胞株Ago2基因敲除后内皮细胞特异性miRNAs及血管内皮生长因子（VEGF）表达明显降低。本研究拟进一步研究Ago2对HUVEC增殖、迁移、体外小管形成的影响，分析Ago2基因敲除MM细胞株miRNAs的表达改变，筛选出其主要调控的内皮细胞特异性miRNAs，并寻找其直接作用的与血管新生相关的靶基因。在体外细胞水平探讨Ago2对血管新生的调控作用，阐明Ago2-miRNAs-血管新生相关靶基因信号通路。继而在SCID-MM小鼠模型和临床水平体内证实Ago2的促进血管新生作用及其发挥作用的信号通路。我们旨在通过此研究从一个新的角度阐述MM的发病机制，并为针对Ago2信号通路治疗MM提供理论依据。

Argonaute 2(Ago2)是RNA沉默复合体(RNA-induced silencing complex RISC)中的重要功能组分，具有核酸内切酶的活性，可促使靶mRNA降解或抑制其蛋白翻译；以及调节microRNAs (miRNAs)生物合成和成熟两方面功能。miRNAs参与调控细胞凋亡、增殖及分化和血管新生等生命活动，影响肿瘤的发生和发展，发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能。 既往研究显示AGO2基因敲除后影响了HUVECs的生长和管型形成。 AGO2是70个预测多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）患者早期死亡的基因之一，为了揭示AGO2在MM血管新生中的作用，该课题采用MACS细胞分选、FISH、RT-PCR、RNA干扰、细胞转染、双荧光素酶报告系统、Western-Blot等技术进行了研究，结果显示：（1）AGO2过表达的MM细胞株上清液能够促进HUVECs的迁移和管型形成以及鸡卵黄囊血管形成；反之，AGO2基因沉默起抑制作用。（2）使用miRNAs表达谱技术，发现AGO2调控25个miRNAs过表达和14个miRNAs低表达。（3）AGO2相关的与血管新生相关的miRNAs主要有：miRNA17-92簇和let-7家族促进血管新生，miR-145和miR-361抑制血管新生。综合以上结果提示：AGO2在MM中血管新生中发挥重要作用，通过调控miRNA17-92簇、let-7家族、miR-145和miR-361等血管新生相关的miRNAs在MM发病中起重要作用。